Nguyên tắc tạo bộ KIT chẩn đoán dựa trên PCR

[Dương Văn Cường]

Em thấy các anh các chị nói đến việc dùng kit trong chuẩn đoán nhiều thứ, không biết nguyên tắc chế tạo một cái kit như vậy thế nào? Anh chị nào có tài liệu hoặc biết website nào nói về vấn đề làm các loại kit không cho em mượn với, em thấy cái này hay quá.

Hiện giờ tôi mới biết có 2 loại KIT chẩn đoán nhanh. Loại 1 dựa trên phản ứng PCR và loại 2 dựa trên phản ứng Kháng nguyên - Kháng thể.

Nguyên tắc tạo bộ kit loại 1:

+ Bước 1: Nghiên cứu xem để phát hiện một tác nhân gây bệnh nào đó (virus, vi khuẩn ...) thì tốt nhất là phát hiện dựa trên sự có mặt của đoạn acid nucleic nào của tác nhân đó. Thông thường người ta chọn đoạn DNA nằm ở vùng bảo thủ cao của sinh vật. Lưu ý ở đây là phát hiện đinh tính ĐOẠN DNA/RNA nào đó chứ không nhất thiết phải là phát hiện gen nào đó. Đây cũng là bước khó khăn, mất thời gian, tốn tiền nhất của quy trình.
+ Bước 2: Khi đã tìm được đối tượng của phản ứng PCR, dĩ nhiên phải tiến hành làm PCR để xem có tóm cổ được cái đoạn đó không.
+ Bước 3: Sau khi bước 2 thành công, chuẩn hóa quy trình PCR và tối ưu về chi phí.
+ Bước 4: Chuẩn hóa quy trình tách chiết DNA/RNA của đối tượng cần chẩn đoán nhanh (virus, vi khuẩn ...) theo một protocol mà sao cho đối tượng chỉ biết lơ tơ mơ, hoặc thậm chí chẳng biết gì về Sinh học phân tử cũng có thể tách chiết được.
+ Bước 5: Thiết kế, chuẩn bị và đóng gói quy trình, chuyển đến cho khách hàng. Cụ thể là các thành phần của phản ứng PCR (trừ template) được cho sẵn vào các ống eppendoft, thông thường được bổ xung chất bảo quản (BSA) và đem đông khô. Các thành phần và quy trình tách chiết DNA/RNA cũng được bán kèm theo. Người sử dụng phải làm công việc là tách DNA, cho DNA đó và H20 vào ống eppendoft KIT có tất cả các thành phần đó, và chạy PCR.

Cụ thể bệnh gây triệu trứng đốm trắng do virus ở tôm (White Spot Syndrome Virus) sử dụng KIT như thế này để chẩn đoán.


Nguyên tắc tạo bộ KIT dựa trên phản ứng Kháng nguyên - Kháng thể phức tạp hơn nhiều. Mấy ngày nữa tôi sẽ post lên. (tìm hiểu kỹ hơn đã :wink: )

 

[Dương Văn Cường]

1. Cách thức để bắt được những VSV như thế nào? ví dụ như với môi trường không khí số lượng VSV rất ít.

Tôi chưa hiểu câu hỏi này liên quan cụ thể với việc chế tạo bộ KIT như thế nào.
Theo ý hiểu của tôi về việc chế tạo bộ KIT thì việc "bắt" được các VSV là không cân thiết. Lý do:
- Trong giai đoạn nghiên cứu lý thuyết (Bước 1 và 2) thì các chủng VSV gây bệnh thường được cung câp bởi các ngân hàng VSV. (Việc các ngân hàng VSV đó bắt được VSV như thế nào thì là cả câu chuyện dài, nên tách biệt khỏi chủ đề về KIT)
- Trong giai đoạn sau, ứng dụng vào thực tiễn, thì mục đích của bộ KIT cũng không phải là tóm được VSV mà là tóm được cái đoạn DNA của VSV đó trong cơ thể của sinh vât bị gây bệnh.

2. Với các bào tử thì KIT trên có dùng dược không?

Tôi quên mât bào tử nó như thế nào rồi , . Nhưng chúng ta có thể hiểu nguyên tắc của bộ kit là ĐỊNH TÍNH sự có mặt hay không của tác nhân gây bệnh trong cơ thể của sinh vât cân kiểm tra. Do đó nếu bào tử gây bệnh tồn tại trong cơ thể của SV bị bệnh, và các nghiên cứu có thể tách chiêt được DNA tổng số của cả vât chủ và vât gây bệnh, thì về mặt lý thuyết không có lý do gì không áp dụng được. Khó khăn nếu có chắc chỉ nằm ở khâu tách DNA.

 

[Thành viên cũ]

He , góp ý 1 chút .... hình như "Bào tử" là vsv sống ở dạng tiềm sinh ...cho nên theo mình 99% là nó ko phải là tác nhân gây bệnh nên có lẽ ko có cơ may tách được đoạn DNA quy định tác nhân :? .

 

[VanKiemsau]

bài quy trình thiết kế các bộ kit chuẩn đoán sử dụng PCR của anh Don'tcry rất hay

to addtech: khi thiết kế các bộ kit thì các nhà khoa học đã phải tính đến tất cả các yếu tố rồi (nếu đối tượng của bạn là vi khuẩn sống trong không khí thì bô kit se co phần thu thập mẫu vi khẩn trong không khí. Các bộ kit khi được thiết kế và bán trên thị trường đều kèm theo phần hướng dẫn sử dụng, bạn chỉ cần làm theo hướng dẫn sử dụng là co ket quả mong muốn ngay.

đối với bào tử thì DNA của nó được bao bọc trong lớp vỏ khá kiên cố. Tuy nhiên các kit thiết kế cho đối tượng này lại có các chất làm tan lớp vỏ này khá hiệu quả và như vậy là DNA của bào tử đã sẵn sàng cho phản ứng PCR phải không.

 

[Homosapiens]

Xin chào các bạn, mình là một thành viên mới của diễn đàn.
Mình đồng ý với bạn Vankiemsau. Bào tử vẫn có DNA hoặc RNA do đó PCR vẫn có thể khuyếch đại DNA/ cDNA này lên chứ ! Còn về chuyệnVSV trong không khí theo mình vấn đề này hoàn toàn không có ý nghĩa (hay mình chưa hiểu ?) bởi vì nguồn mẫu ban đầu để tách chiết nucleic acid cho PCR đều rất cụ thể như mẫu bệnh phẩm, mẫu thực phẩm, mẫu sinh thiết...
Theo mình việc xây dựng nên một bộ kit để chẩn đoán các tác nhân gây bệnh ở người, ĐV, TV hay chẩn đoán bệnh di truyền... bằng kỹ thuật PCR cũng không khó lắm!
À, theo mình PCR chỉ là một phần của một bộ kit thôi.

 

[Nguyễn Thị Phương Trang]

Re: Nguyên tắc tạo bộ KIT chẩn đoán dựa trên P

Em thấy các anh các chị nói đến việc dùng kit trong chuẩn đoán nhiều thứ, không biết nguyên tắc chế tạo một cái kit như vậy thế nào? Anh chị nào có tài liệu hoặc biết website nào nói về vấn đề làm các loại kit không cho em mượn với, em thấy cái này hay quá.

Hiện giờ tôi mới biết có 2 loại KIT chẩn đoán nhanh. Loại 1 dựa trên phản ứng PCR và loại 2 dựa trên phản ứng Kháng nguyên - Kháng thể.

Nguyên tắc tạo bộ kit loại 1:

+ Bước 1: Nghiên cứu xem để phát hiện một tác nhân gây bệnh nào đó (virus, vi khuẩn ...) thì tốt nhất là phát hiện dựa trên sự có mặt của đoạn acid nucleic nào của tác nhân đó. Thông thường người ta chọn đoạn DNA nằm ở vùng bảo thủ cao của sinh vật. Lưu ý ở đây là phát hiện đinh tính ĐOẠN DNA/RNA nào đó chứ không nhất thiết phải là phát hiện gen nào đó. Đây cũng là bước khó khăn, mất thời gian, tốn tiền nhất của quy trình.
+ Bước 2: Khi đã tìm được đối tượng của phản ứng PCR, dĩ nhiên phải tiến hành làm PCR để xem có tóm cổ được cái đoạn đó không.
+ Bước 3: Sau khi bước 2 thành công, chuẩn hóa quy trình PCR và tối ưu về chi phí.
+ Bước 4: Chuẩn hóa quy trình tách chiết DNA/RNA của đối tượng cần chẩn đoán nhanh (virus, vi khuẩn ...) theo một protocol mà sao cho đối tượng chỉ biết lơ tơ mơ, hoặc thậm chí chẳng biết gì về Sinh học phân tử cũng có thể tách chiết được.
+ Bước 5: Thiết kế, chuẩn bị và đóng gói quy trình, chuyển đến cho khách hàng. Cụ thể là các thành phần của phản ứng PCR (trừ template) được cho sẵn vào các ống eppendoft, thông thường được bổ xung chất bảo quản (BSA) và đem đông khô. Các thành phần và quy trình tách chiết DNA/RNA cũng được bán kèm theo. Người sử dụng phải làm công việc là tách DNA, cho DNA đó và H20 vào ống eppendoft KIT có tất cả các thành phần đó, và chạy PCR.

Cụ thể bệnh gây triệu trứng đốm trắng do virus ở tôm (White Spot Syndrome Virus) sử dụng KIT như thế này để chẩn đoán.


Nguyên tắc tạo bộ KIT dựa trên phản ứng Kháng nguyên - Kháng thể phức tạp hơn nhiều. Mấy ngày nữa tôi sẽ post lên. (tìm hiểu kỹ hơn đã :wink: )

Lạ thật, đã gọi là Kit chẩn đoán thì có nghĩa là phải dùng với những đối tượng mà bị nghi ngờ là có thể nhiễm bệnh, chứ có phải là tìm vi khuẩn hay virus ở đâu đâu mà hỏi là trong không khí hay gì.
Bào tử là dạng sống tiềm sinh, trong điều kiện môi trường không thuận lợi hoặc phải sống ngoài host cell (vi rút) thì chúng mới phải tạo bào tử, chứ còn trong cơ thể sinh vật (host cell) nghã là điều kiện sống tốt như thế thì sao chúng phải tạo bào tử, hơn nữa bào tử chẳng có khả năng gây bệnh gì cả.
Nhưng mà ở bước 4, tớ không hiểu tại sao phải chuẩn hóa qui trình tách chiết DNA. Tạo bộ Kit là để dùng cho người bệnh, nếu họ nghi ngờ bị nhiễm bệnh thì dùng Kit để kiểm tra xem mình có bị bệnh hay không, thế thôi. Chứ giả sử khi biết mình bị bệnh rồi thì họ phải đến bệnh viện hoặc gì khác chứ họ tự tách DNA của vi rút đấy ra làm gì? (cái này tớ chẳng hiểu).
Còn phản ứng háng nguyên kháng thể thì không cần phải dựa vào DNA (vật liệu DT) mà dùng protein để kiểm tra. Vi dụ nếu bệnh nhân bị nhiễm 1 vi rút gây bệnh nào đó thì cơ thể sẽ tiết ra kháng sinh để chống lại con vi rút đó. Do vậy dựa vào sự có mặt của kháng nguyên này thì người ta sẽ kết luận được là đối tựơng đó có bị nhiễm bệnh hay không.

 

[Dương Văn Cường]

Nhưng mà ở bước 4, tớ không hiểu tại sao phải chuẩn hóa qui trình tách chiết DNA. Tạo bộ Kit là để dùng cho người bệnh, nếu họ nghi ngờ bị nhiễm bệnh thì dùng Kit để kiểm tra xem mình có bị bệnh hay không, thế thôi. Chứ giả sử khi biết mình bị bệnh rồi thì họ phải đến bệnh viện hoặc gì khác chứ họ tự tách DNA của vi rút đấy ra làm gì? (cái này tớ chẳng hiểu).

Thắc mắc cực kỳ ngộ nghĩnh

Chuẩn hóa quy trình tách chiết DNA là để cho những người làm công tác xét nghiệm (bệnh viện, phòng khám, trạm xá ...) họ tách DNA của người bệnh, chứ làm gì có chuyện người bệnh tách DNA của virus, vi khuẩn.

 

[Nguyễn Thị Phương Trang]

Tách chiết DNA và dùng PCR để phát hiện ra sự có mặt của 1 đoạn DNA của vi rút là 2 cái khác nhau, dontcry có nhầm không?
Ví dụ cụ thể khi đối tượng bị nghi ngờ là nhiễm bệnh thì sẽ đến bệnh viện để kiểm tra, bác sỹ sẽ lấy mẫu máu của đối tượng và chạy PCR để kiểm tra (sử dụng những hóa chất và primer có sắn trong Kit), nếu kết quả là amplify được đoạn DNA của vi rút thì có nghĩa là đới tượng đã bị nhiễm vi rút đó. Khi đã kết luận được là đối tượng bị nhiễm bệnh thì bác sỹ sẽ sử dụng những liệu pháp hoặc thuốc thích hợp để chữa bệnh, thế thôi.
Cho nên tớ mới thắc mắc cần tách chiết DNA của vi rút để làm gì?, cái này chỉ dể dành cho các nhà khoa học nghiên cứu đặc tính hay cấu trúc... của DNA vi rút đó mà thôi.
Đính chính lại bài post trước là cơ thể sẽ sản xuất ra kháng thể (chứ không phải là kháng sinh, đánh nhầm).
Cái khó nhất của phương pháp tạo Kit bằng PCR là phải thiết kết được cặp mồi đặc hiệu cho từng loại vi rút khác nhau (đặc biệt những vi rút có quan hệ càng gần gũi thì DNA càng giống nhau).
Còn trong phương pháp tạo kit bằng phản ứng miễn dịch thì khó nhất là phải tạo đựơc kháng thể đơn dòng đặc hiệu, chỉ tạo liên kết với đúng loại protein cần quan tâm

 

[Dương Văn Cường]

+ Bước 4: Chuẩn hóa quy trình tách chiết DNA/RNA của đối tượng cần chẩn đoán nhanh (virus, vi khuẩn ...) theo một protocol mà sao cho đối tượng chỉ biết lơ tơ mơ, hoặc thậm chí chẳng biết gì về Sinh học phân tử cũng có thể tách chiết được.

Ờ đúng rồi, tớ viết sai (chả hiểu sao lại viết thế).

Tách DNA của người bệnh chứ không phải tách DNA của virut vi khuẩn gì cả.

Sắp thành nhà khoa học rùi Sorry bà con và cảm ơn meomeo.

Meo meo này, cậu đã làm thực nghiệm có liên quan đến cái kít kiếc nào chưa ?

 

[Trương Quốc Phong]

Toi thi nghi rang ban Dontcry cung khong nham dau:
Thuc chat thi chung ta can phai tach ADN cua doi tuong gay benh thi moi lam duoc phan ung PCR chu, nhung co mot van de ma cac ban can hieu ro do la: doi tuong gay benh sau khi xam nhap vao co the vat chu thi no cu tru o dau? no cu tru o plasma hay trong te bao. Chang han khi vi rut sam nhap vao te bao nguoi thi ta phai tach ADN tu te bao nguoi nhung ''khong han'' da phai su dung ADN nguoi lam khuon cho PCR tru truong hop Vi rut do da xen ADN cua no vao he gen cua nguoi. Toi da tung lam thi nghiem chan doan mot so vi rut roi vi du: HBV, HCV, vi rut dom trang o tom. Toi da phai su dung biospy de tach ADN cua chung ma.
Co gi cac ban cung gop y nhe.

 

[sv_ngheo]

Mọi người có hơi chủ quan mà chỉ bàn đến những cách phát hiện thông thường. Đấy chỉ là trên lý thuyết thôi, chứ trên thực tế đôi khi ko phải đơn giản như vậy.


Cái việc quan trọng nhất trong quá trình tạo bộ KIT chẩn đoán là phải xác định được đoạn gen đặc trưng nhất cho đối tượng mà mình quan tâm. Đã ai trong forum này mắc phải việc chẩn đoán sai lầm, nhầm nhọt vì đối tượng mà ta quan tâm lại quá giống hoặc quá tương đồng về trình tự gen với bà con họ hàng của nó chưa.

Ví dụ giữa bọn Bacillus chẳng hạn. Khá nhiều nhà khoa học đau đầu vì bọn này rồi đấy, thử dùng Blast sẽ thấy chúng khó chịu ra sao. Bacillus anthracis là chủng nguy hiểm, trong khi đó Bacillus cereus và Bacillus thuringiensis lại phình phường thôi. Vấn đề ở chỗ nếu bạn không biết rõ chúng khác nhau ở đoạn gen nào thì đừng có hòng phân biệt được. Hơn thế nữa lấy được đoạn đó rồi, bạn còn cần phải xem xét xem liệu đoạn gen đặc trưng đó có dễ bị trùng với một chủng Bacillus nào hay một loài cha căng chú kiết nào đó nữa không. Việc này lại còn phải bàn thêm nữa.


Chính vì vậy, kết quả của các test thử nhanh chỉ được sử dụng để sàng lọc (screening test) chứ không được dùng để làm test chẩn đoán (confirm test)

Nói tóm lại, trên lý thuyết là việc ở mặt đất, còn thực tế là việc của trên trời, cần phải học thêm nhiều để có thể bay lên trời được. .. ..

Và nếu bạn nghe một ai đó nói đã từng phát hiện HBV, HCV, HIV... rồi thì cũng đừng có coi là cái gì ghê gớm, chỉ là dùng KIT thôi, mà dùng KIT thì ai mà chả làm được, khác nào nấu mì gói....

 

[Trương Quốc Phong]

Sao bạn Sv_ngheo cữ nghĩ mọi vấn đề đều phức tạp thế nhỉ. Bạn nên biết rằng " chân lý bao giờ cũng là cái đơn giản nhất", chắc bạn hiểu ý tôi chứ.
- Tôi nghĩ rằng chắc gì bạn đã biết nấu được bát mì tôm ngon. Khi người ta hiểu về thành phần của mì tôm có thể người ta sẽ nấu được bát mì ngon đấy.

 

[sv_ngheo]

Mọi thứ đều phải bắt đầu từ thực tế. Bạn cố tình bỏ qua chi tiết mang tính quyết định thì không bao giờ tự làm được điều gì.

Việc sử dụng các đoạn mồi có sẵn để chẩn đoán sẽ làm cho bạn trở nên ỷ lại, và như vậy chỉ cần một kỹ thụât viên quèn cũng làm được, đâu có cần phải thạc sỹ - cử nhân.. Trong thời gian sắp tới, bạn còn phải đụng tới vấn đề bản quyền nữa, không xài sẵn được đâu.

Bạn hiểu thành phần nhưng chỉ là trên lý thuyết thôi, bắt tay vào thực tế rồi bạn sẽ phải trải qua câu hỏi như tôi đã nói ngay thôi mà, khi ấy hết đường mà lý luận ...

Bạn có thể nấu được mỳ ngon từ gói mỳ có sẵn, còn tôi có thể tự làm ra mỳ, tự chế biến theo khẩu vị cá nhân và có thể thay đổi tuỳ thích. Nhưng thạc sỹ (đang là tiến sỹ hờ) như bạn mà chỉ làm được như vậy thì có phải là một sự lãng phí lớn cho đất nước hay không. Hả bạn PHong ?

 

[Cao Xuân Hiếu]

Mọi thứ đều phải bắt đầu từ thực tế. Bạn cố tình bỏ qua chi tiết mang tính quyết định thì không bao giờ tự làm được điều gì....

sv_ngheo và mọi ng cần hiểu cho chúng tôi (biopro) mong muốn xây dựng SHVN là "một sân chơi nghiêm túc và thuần túy khoa học" (điều này bất kỳ guest nào cũng có thể đọc được trước khi đăng ký thành viên của SHVN).

Chúng tôi ko khuyến kích mọi ng biểu diễn hay xả stress tại SHVN. Mọi thảo luận cần trực tiếp, có tính xây dựng hoặc học hỏi. Tôi không muốn phải lặp lại các điệp khúc này. Mong rằng mọi ng tuân thủ và sử dụng SHVN đúng mục đích. Nếu ai đó muốn chỉ cống hiến thì hãy viết các điều bạn biết ra Blog hoặc WikipediA.

Trở lại chủ đề, đây là một chủ đề quan trọng và dễ ứng dụng vào thực tiễn VN. Chi phí trang thiết bị thấp, ít đòi hỏi đào tạo nhiều. Do vậy, nếu những ng thực sự có kinh nghiệm trong việc này mà bàn luận thẳng vào vấn đề khoa học (đừng chạy lòng vòng hay đánh đố ng khác làm mất thời gian mọi ng) thì mọi ng sẽ cùng học hỏi được nhiều hơn. Nói là công nghệ nhưng nó cũng chẳng đến nỗi cao quá mà sợ nói ra mọi ng ko hiểu được đâu

Vấn đề ở đây được tóm lại ở 2 bước then chốt là
1. "đặt vấn đề & thiết kế primer" giải quyết tại đây http://www.sinhhocvietnam.com/vn/modules.php?name=Forums&file=viewtopic&p=4353#4353
2. "tối ưu hóa PCR và điện di".
Xin mọi ng thảo luận tiếp ở đây hoặc mở các chủ đề mới tương ứng.

...
Nhân đây, dự án Biocon Valley hợp tác với khu công nghệ cao Láng Hòa Lạc vừa tiến thêm 1 bước quan trọng. Đoàn VN do thứ trưởng Trần Quốc Thắng dẫn đầu vừa đến Greifswald trưa nay. Dự án với cái tên rất ấn tượng "BioCon Valley - from Science to Business".

 

[Trương Quốc Phong]

Trước tiên cho tôi xin lỗi các thành viên của diễn đàn vì điều tôi nói dưới đây không nằm trong nội dung của diễn đàn, nhưng vì tôi không có địa chỉ của bạn sv_ngheo nên không thể trao đổi trực tiếp với bạn ấy được.
Chào bạn sv_ngheo, tôi có một số vấn đề cần trao đổi với bạn.
- Bạn hòan toàn đúng khi cho rằng Khoa học là phải gắn liền với thực tiễn, lý thuyết là phải gắn với thực hành, vì sao tôi lại nói bạn đúng là vì điều này đã được Mác nói trong học thuyết của mình và nó cũng đã được chứng minh qua thực tiễn (đa phần ai cũng biết).
Tuy nhiên, có một số vấn đề bạn cần lưu ý không thì bạn lại trở thành người lý thuyết xuông.
- Tôi thấy bạn nói rất hay nhưng không thấy bạn đưa ra được điều thực tiễn nào để chứng minh cho điều bạn nói cả.
- Lúc đầu tôi nghĩ bạn chắc là một người cũng cần phải kính nể đây nhưng cuối cùng thì thấy rằng bạn cũng chỉ là một người tầm thường. Vì sao tôi lại nói như vậy? vì thấy bạn suy nghĩ vấn đề chỉ có một chiều và bạn chỉ nghĩ là mỗi mình bạn biết tầm quan trọng của thực nghiệm, mỗi mình bạn biết thiết kế primer à, tầm thường thôi. Nếu bạn muốn tham khảo thêm về thiết kế mồi thì tôi có thể gửi cho bạn vài phần mềm và những điều lưu ý có liên quan mà tôi đã làm cách đây 5 năm rồi. Hoặc học trò của tôi họ cũng có thể giúp bạn điều đó.
- Còn về vấn đề hiểu biết của bạn cũng có nhiều chỗ phải bàn nhưng tôi sẽ trao đổi riêng với bạn sau vì tôi không tiện nói ở đây.
- Một vấn đề khác nữa cần nhắci bạn đó là "tư cách", chẳng lẽ bạn không biết tư cách của mình là gì à?

Tôi nghĩ rằng bạn đã biết tôi, còn tôi thì chưa biết bạn là ai. Nhưng vì bạn gọi tôi là "bạn" nên tôi cũng chỉ gọi bạn là "bạn" thôi, nếu bạn hơn tuổi tôi thì cho tôi xin lỗi về cách xưng hô nhé.
Tôi thấy còn nhiều vấn đề chúng ta cần trao đổi nghiêm túc, nếu có thể bạn cho tôi xin địa chỉ để chúng ta có thể trao đổi riêng vì tôi không muốn làm phiền đến các thành viên khác. Địa chỉ của tôi bạn sẽ tìm thấy trong phần thông tin cá nhân của Diễn đàn này.
Một lần nữa thành thật xin lỗi các thành viên của Diễn đàn.
Chào thân ái!

 

[Trần Hoàng Dũng]

thôi thôi, xin van các you, tha cho nhau đi.

Tự do tư tưởng đi, thỏai mái suy nghĩ, mạnh dạn phát biểu.

Đúng hay sai tự mình biết, thế cho nó khoẻ người, đừng ép nhau là Tui đúng nên anh /chị cũng phải đúng theo tui.

Vậy nhé.

Lâu quá kô được nhậu, thèmmmmmmmmmmm quá

 

[sv_ngheo]

Bạn đừng nên nói về tư cách, về "tầm thường" và về những điều không hay khác. Một nhà khoa học không nên nhảy ngược lên như vậy, kể cả trong khi tranh luận.

Nói là nói vậy thôi, nếu tâm huyết và có thể thì mời các bạn thảo luận chi tiết, chứ cứ nếu người khác đề nghị chi tiết lại "chân lý bao giờ cũng là cái đơn giản nhất", "chắc gì bạn đã biết biết mà cũng đòi" thì chẳng bao giờ có thể bàn cụ thể vấn đề gì cả.

Tôi không thích biểu diễn, cũng chẳng muốn đừng từ xa hô hào hoạch định chính sách, vì vậy có thể gây ra những hiểu lầm cho người khác.

Chẳng sao cả.

 

[Bùi Thúy Nga]

Re: Nguyên tắc tạo bộ KIT chẩn đoán dựa trên P

+ Bước 1: Nghiên cứu xem để phát hiện một tác nhân gây bệnh nào đó (virus, vi khuẩn ...) thì tốt nhất là phát hiện dựa trên sự có mặt của đoạn acid nucleic nào của tác nhân đó. Thông thường người ta chọn đoạn DNA nằm ở vùng bảo thủ cao của sinh vật. Lưu ý ở đây là phát hiện đinh tính ĐOẠN DNA/RNA nào đó chứ không nhất thiết phải là phát hiện gen nào đó. Đây cũng là bước khó khăn, mất thời gian, tốn tiền nhất của quy trình.

Em không hiểu lắm về bước 1 của quy trình trên, được thực hiện như thế nào ah? và làm sao tìm được đoạn DNA nằm ở vùng bảo thủ cao? Mọi người giải thích giúp em với! Vì đây là bước khó khăn, mất thời gian, tốn tiền nhất muh!

 

[Nguyễn Viết Dũng]

Đầu tiên bạn cần phân lập được virus rồi kế đến tinh sạch vật liệu di truyền sau đó là giải trình tự. Ngoài ra còn có thể dùng một số kỹ thuật PCR đặc biệt khác để phân lập ngẫu nhiên vật vật liệu di truyền có trong mẫu rồi sau đó đem ?lai với vật liệu di truyền của ký chủ để phát hiện sự hiện diện của vật liệu di truyền khác lạ ?(của tác nhân gây bệnh) so với ký chủ.

Để tìm được vùng bảo tồn rất mất thời gian.Bạn cần ?phân lập nhiều chủng (virus vi khuẩn ) khác nhau mà bạn đang nghiên cứu, kế đến là giải trình tự của vật liệu di truyền của chúng. Bước cuối cùng là ?dùng phần mềm bioformatics để tìm ra vùng bảo tồn từ các trình tự nói trên .

Trên cơ sở vùng bảo tồn này bạn sẽ thiết kế mồi đặc hiệu cho phản ứng PCR mà bạn mong muốn

 

[Bùi Thúy Nga]

Dùng phần mềm bioinformatics, cụ thể là phần mềm nào ah? và đặc điểm của vùng bảo tồn là như thế nào? Anh giải thích thêm với! Và nếu không có phần mềm này thì như thế nào ah!