Trần Thiện Toàn
Senior Member
Em đang tách DNA plasmid từ E.coli bằng cả 2 phương pháp, sau đó điện di trên gel 1%. Tách bằng Kit thì chỉ có 1 vạch, còn tách bằng P/C thì có 3 vạch. Tại sao lại có sự khác biệt như thế?
Sự khác biệt giữa tách DNA plasmid bằng Quiagen Kit và Phenol/chloroform
- Thread starter Trần Thiện Toàn
- Start date
Các vạch kia là plasmid dạng nicked, thẳng hoặc tháo xoắn (open circular), mình tách bằng kit vẫn có các vạch này. Có khác chăng là bên kit không có RNA thôi.
Cái này đoán thôi nhé. Thường khi tách bằng P/C thì có 3 vạch, 1 trong số đó là plasmid ở dạng siêu xoắn. Nhưng khi tách bằng kit thì dạng siêu xoắn này bị giãn ra do tương tác với membrane của column, kiểu như dùng tay bốc 1 nắm dây thép mềm thì dây bị co cụm lại, còn dùng nam châm hút thì đống dây căng ra do từ trường tác động đều lên mọi điểm. Đoán bừa vậy thôi.
Góp ý một tẹo cho vui
Thường thì kit tách tinh sạch sản phẩm dna hoặc rna đến công đoạn cuối là lọc sản phẩm bằng kích thước phân tử (dựa trên kích thước lỗ màng)
Em điện di trên gel 1% nhưng ko nói rõ gel có cấu tạo ntn, phương pháp phát hiện sản phẩm nữa ... Sau khi tách thì thu được một số sản phẩm ...
nên thấy như thế là bt thôi.
Thường thì kit tách tinh sạch sản phẩm dna hoặc rna đến công đoạn cuối là lọc sản phẩm bằng kích thước phân tử (dựa trên kích thước lỗ màng)
Em điện di trên gel 1% nhưng ko nói rõ gel có cấu tạo ntn, phương pháp phát hiện sản phẩm nữa ... Sau khi tách thì thu được một số sản phẩm ...
nên thấy như thế là bt thôi.
Vũ Hải Chi
Senior Member
Hỏi chút: Kit tách theo nguyên lí trên là của hãng nào thế?
Co nhieu hang san xuat "Plasmid DNA Purification Kit". Cac laboratories o My thuong dung Qiagen hoac Promega.
Ban co the tham khao hang Fermentas- Đức
http://www.fermentas.com/templates/files/tiny_mce/coa_pdf/coa_k0502.pdf
Nếu bạn có nhu cầu vui lòng liên hệ Mr Hưng( 0937.886.577)
Ho Huu Tho
Senior Member
Không biết kit của Millipore có phải là cái mà anh Chi cần không?
Cái câu này là không đúng. Chắc nhầm với sắc ký lọc gel hoặc cut off protein MW. Các kit tinh sạch DNA và RNA hiện giờ ko phải là hoạt động theo nguyên lý này. Đây là ý của câu hỏi của Chi.
Mình nghĩ đó là plasmid bị đứt gãy do thao tác tách, còn bạn nói là bên kit không có RNA >> cái này chưa chác vì khi mình chiết bằng kit lúc điện di vẫn có smear nên chắc là vẫn còn
Hoàng Anh Hoàng
Senior Member
mình mới cắt plasmid vector bằng cặp Enzyme giới hạn BamHI và EcoRI, điện di xuất hiện 1 vạch--> OK. Nhưng sau khi tinh sạch bằng kit (theo nguyên tắc kết tủa bới Ethanol), điện di kiểm tra thấy xuất hiện 1 vạch phụ mờ, nằm phía trên vạch chính. Có phải là 2 fragments tự kết hợp với nhau ko nhỉ?
