Sự khác biệt giữa tách DNA plasmid bằng Quiagen Kit và Phenol/chloroform

Em đang tách DNA plasmid từ E.coli bằng cả 2 phương pháp, sau đó điện di trên gel 1%. Tách bằng Kit thì chỉ có 1 vạch, còn tách bằng P/C thì có 3 vạch. Tại sao lại có sự khác biệt như thế?
 
Sau khi tach Plasmid tu E.coli bang phenol/chloroform lam tiep cong doan tinh sach plasmid bang PE thi se con 1 vach, do la plasmid. Neu chua tinh sach thuong co cac vach hon don khac.
 
Các vạch kia là plasmid dạng nicked, thẳng hoặc tháo xoắn (open circular), mình tách bằng kit vẫn có các vạch này. Có khác chăng là bên kit không có RNA thôi.
 
Cái này đoán thôi nhé. Thường khi tách bằng P/C thì có 3 vạch, 1 trong số đó là plasmid ở dạng siêu xoắn. Nhưng khi tách bằng kit thì dạng siêu xoắn này bị giãn ra do tương tác với membrane của column, kiểu như dùng tay bốc 1 nắm dây thép mềm thì dây bị co cụm lại, còn dùng nam châm hút thì đống dây căng ra do từ trường tác động đều lên mọi điểm. Đoán bừa vậy thôi.
 
Góp ý một tẹo cho vui
Thường thì kit tách tinh sạch sản phẩm dna hoặc rna đến công đoạn cuối là lọc sản phẩm bằng kích thước phân tử (dựa trên kích thước lỗ màng)
Em điện di trên gel 1% nhưng ko nói rõ gel có cấu tạo ntn, phương pháp phát hiện sản phẩm nữa ... Sau khi tách thì thu được một số sản phẩm ...
nên thấy như thế là bt thôi.
 
Cho em hỏi là plasmid ở dạng hình học nào: siêu xoắn hay dạng mở vòng được sử dụng ạ (dễ cắt bằng enzym giới hạn và chèn đoạn gen mong muốn vào). Em cảm ơn trước ạ. (Thú nhận là em không chuyên về kỹ thuật gen)
 
Góp ý một tẹo cho vui
Thường thì kit tách tinh sạch sản phẩm dna hoặc rna đến công đoạn cuối là lọc sản phẩm bằng kích thước phân tử (dựa trên kích thước lỗ màng)

Hỏi chút: Kit tách theo nguyên lí trên là của hãng nào thế?
 
Góp ý một tẹo cho vui
Thường thì kit tách tinh sạch sản phẩm dna hoặc rna đến công đoạn cuối là lọc sản phẩm bằng kích thước phân tử (dựa trên kích thước lỗ màng)

Cái câu này là không đúng. Chắc nhầm với sắc ký lọc gel hoặc cut off protein MW. Các kit tinh sạch DNA và RNA hiện giờ ko phải là hoạt động theo nguyên lý này. Đây là ý của câu hỏi của Chi.
 
Các vạch kia là plasmid dạng nicked, thẳng hoặc tháo xoắn (open circular), mình tách bằng kit vẫn có các vạch này. Có khác chăng là bên kit không có RNA thôi.
Mình nghĩ đó là plasmid bị đứt gãy do thao tác tách, còn bạn nói là bên kit không có RNA >> cái này chưa chác vì khi mình chiết bằng kit lúc điện di vẫn có smear nên chắc là vẫn còn :mrgreen:
 
mình mới cắt plasmid vector bằng cặp Enzyme giới hạn BamHI và EcoRI, điện di xuất hiện 1 vạch--> OK. Nhưng sau khi tinh sạch bằng kit (theo nguyên tắc kết tủa bới Ethanol), điện di kiểm tra thấy xuất hiện 1 vạch phụ mờ, nằm phía trên vạch chính. Có phải là 2 fragments tự kết hợp với nhau ko nhỉ?
 
tách chiết DNA

các bác cho em hỏi, làm cách nào để xử lý protein bị biến tính không triệt để, có "bóng mây" phía trên lớp dịch acid nucleic khi tách chiết DNA.
em cảm ơn nhiều!
 

Facebook

Thống kê diễn đàn

Threads
11,649
Messages
71,548
Members
56,922
Latest member
188bettone
Back
Top