Điều kiện tối ưu để bảo quản protein?

[Dương Văn Cường]

Sản xuất được ra một chú protein tái tổ hợp đã là rất khó, nhưng ứng dụng được nó vào thực tế còn khó hơn cả trăm lần. Một trong những điều gây ra khó khăn đó là Bảo quản protein.

Ví dụ: Để đưa được ra thị trường 1 bộ KIT chẩn đoán bằng DOT BLOT, thì thời gian mà protein tái tổ hợp của bộ KIT còn giữ được hoạt tính là yếu tố then chốt.

Mong các anh/chị có kinh nghiệm và chuyên môn chỉ dẫn các điểm lý thuyết cơ bản:

1. Các nguyên tắc để tối ưu hóa điều kiện bảo quản protein.
2. Các yếu tố chính ảnh hưởng lên việc bảo quản.
3. Các chất bảo quản.


Cụ thể trong trường hợp của tôi, tôi có 1 đoạn protein tái tổ hợp với kích thước ~ 34Kda, có đuôi Histag và đã được tinh sạch nhờ một bộ KIT theo nguyên lý sắc ký ái lực.
- Tôi cần phải tính toán như thế nào để tối ưu hóa điều kiện bảo quản cho protein này?
- Theo kinh nghiệm của anh/chị, chất bảo quản nào nên được sử dụng?
- Thời gian "sống" (còn hoạt tính kháng nguyên) của một protein tối đa được bao nhiêu lâu?

Xin cảm ơn!

 

[Lê Tiến Dũng]

1. Các nguyên tắc để tối ưu hóa điều kiện bảo quản protein.
2. Các yếu tố chính ảnh hưởng lên việc bảo quản.

Nhiệt độ (4, < -20, <-80, < -200, etc), chất bảo quản (below), dạng bảo quản (dung dịch, immobilized, dạng đông khô, v.v..)

3. Các chất bảo quản.

Glycerol, BSA, Sucrose (ai biết bổ sung thêm)



Cụ thể trong trường hợp của tôi, tôi có 1 đoạn protein tái tổ hợp với kích thước ~ 34Kda, có đuôi Histag và đã được tinh sạch nhờ một bộ KIT theo nguyên lý sắc ký ái lực.
- Tôi cần phải tính toán như thế nào để tối ưu hóa điều kiện bảo quản cho protein này?
- Theo kinh nghiệm của anh/chị, chất bảo quản nào nên được sử dụng?
- Thời gian "sống" (còn hoạt tính kháng nguyên) của một protein tối đa được bao nhiêu lâu?

Cần phải biết là bạn có thể bảo quản protein của bạn dưới dạng gì thì mới tối ưu được. Ví dụ để bảo quản lâu dài và không dùng đến thì bạn chỉ cần cho 20-50% glycerol rồi cho vào -80oC, còn bảo quản ở dạng mà có thể lấy ra dùng thường xuyên thì lại khác, chẳng hạn Glycerol (20-50%) + BSA (~1%) + Sucrose (~0.01%) rồi cho vào -20oC.

Mình chưa hiểu rõ về nguyên tắc dot blot, nhưng nếu bạn làm kit chẩn đoán dựa trên nguyên tắc kháng nguyên kháng thể dưới dạng paper trip thì cái kháng nguyên/kháng thể sau khi được cố định lên chất mang (thường là mảnh giấy hoặc là các hạt vàng) và làm khô thì có thể bền trong thời gian khoảng 1 năm bảo quản ở 4oC khi bảo quản dài hạn, còn khi đã mở ra để dùng thì có thể bảo quản ở nhiệt độ phòng.

Bạn nào có gì khác thì bổ sung thêm nhé!

 

[Dương Văn Cường]

nếu bạn làm kit chẩn đoán dựa trên nguyên tắc kháng nguyên kháng thể dưới dạng paper trip thì cái kháng nguyên/kháng thể sau khi được cố định lên chất mang (thường là mảnh giấy hoặc là các hạt vàng)

Trong trường hợp này thì có thể sử dụng chất bảo quản không ạ (chất bảo quản được cho vào dung dịch chứa protein trước khi nhỏ lên màng). Nếu có thì thường dùng chất gì?

 

[Lê Tiến Dũng]

Cái này nếu kháng thể/kháng nguyên đi mua thì họ đã có sẵn Sucrose và BSA rồi, không cần bỏ thêm gì nữa.

còn nếu đồ nhà trồng được thì bạn có thể bỏ thêm mấy thứ đó, hoặc không có cũng được!

Goodluck!

 

[Thành viên cũ]

Nhân đọc bài: Điều kiện tối ưu để bảo qu?

Nhân tiện đây mình cũng xin có một câu hỏi:

Để bảo quản protêin thì người ta cho glyxeron vào, bây giờ muốn lấy protein đó ra để cô đặc lại, nâng cao nồng độ của nó lên thì làm thế nào để loại glyxeron đi ?