Thiết kế vector chuyển gen

[xuhui1990]

Em hiểu thiết kế vector chuyển gen thế này:
- Phân lập được 1 gen mình quan tâm,
- Insert đoạn gen đó vào vector chuyển gen đã được công bố ( VD R1000...) bằng cách cùng xử lý với 2 RE rồi sau đó ligate.
Sơ sơ là như thế nhưng em không hiểu là khi xử lý vector với 2 RE thì sẽ cắt vector ở chính xác 2 điểm mình quan tâm ( vì đã công bố chính xác các vị trí cắt) còn xử lý đoạn gen của mình thì làm sao biết chắc chắn khi ligate sẽ được đầy đủ gen (tức là có đủ start codon và stop codon)
Khó quá. Anh chị có kinh nghiệm bảo em nhé.

 

[Dương Văn Cường]

Em hỏi để làm thí nghiệm hay để viết tiểu luận?

 

[xuhui1990]

Em thấy mấy anh ở lab làm nhưng ko theo được từ đầu nên post lên hỏi.
Anh Cường có thể chỉ cho e từng bước ko?
Từ lúc đã phân lập được gen. Thank anh nhieu

 

[Dương Văn Cường]

1. Ở VN thường làm lại của thế giới, tức là trình tự gene đã biết.
2. Có thể treo 2 đầu của đoạn gene với 2 trình tự cắt của enzyme giới hạn khi thiết kế mồi PCR.

Đơn giản vậy thôi

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Bạn phải thiết kế trên máy tính hết cả đã chứ. Ví dụ cho cái thằng gene bạn vào vector rồi dịch mã nó ra xem có giống trình tự protein quan tâm không. Plasmid nào cũng bán dưới dạng 3 khung đọc nên phải chọn thằng nào hợp với sản phẩm PCR của bạn nữa.

 

[Lê Đức Dũng]

Em hiểu thiết kế vector chuyển gen thế này:
- Phân lập được 1 gen mình quan tâm,
- Insert đoạn gen đó vào vector chuyển gen đã được công bố ( VD R1000...) bằng cách cùng xử lý với 2 RE rồi sau đó ligate.
Sơ sơ là như thế nhưng em không hiểu là khi xử lý vector với 2 RE thì sẽ cắt vector ở chính xác 2 điểm mình quan tâm ( vì đã công bố chính xác các vị trí cắt) còn xử lý đoạn gen của mình thì làm sao biết chắc chắn khi ligate sẽ được đầy đủ gen (tức là có đủ start codon và stop codon)
Khó quá. Anh chị có kinh nghiệm bảo em nhé.

thực ra về mấy cía này mình cũng chả biêt mấy , nhưng mình có làm về cái này rồi thì theo từng bước sau:
- PCR cái đoạn ADN đã xác định
- digestion cả vector và PCR-produkte với 2 enzym xác định A, B nào đó
- Ligation, trasformation......
- sản phẩm sau Ligation,transformation......hoặc kiểm tra xem ligation có đựoc ko thi lai dùng A,B digest , lại ra insert và vector, tách nó ra bằng Agaroseelektro. 1%
-dùng cái đoạn insert kia sequence ra là biết có đủ đầu đuôi ko ngay..

ko biêt cong gi nua ko nhi , luc nao nho ra sẽ viet vao tiep

 

[xuhui1990]

1. Ở VN thường làm lại của thế giới, tức là trình tự gene đã biết.
2. Có thể treo 2 đầu của đoạn gene với 2 trình tự cắt của enzyme giới hạn khi thiết kế mồi PCR.

Đơn giản vậy thôi

Đấy, em muốn hỏi là thiết kế thế nào để có thể treo hai đầu của đoạn gen ( tức là bắt đầu bằng start codon đến stop codon) vào 2 trình tự cắt của emzym giới hạn.

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Theo tôi hiểu thì bạn này đang thắc mắc về lý thuyết (không hiểu cắt thế rồi gắn vào có đúng frame, gene nên có start codon của bản thân nó hay không...v.v)
Bạn rõ ràng chưa đụng dao đụng kéo. Nếu muốn biết thêm về thực hành thì có thể đọc các cuốn này trước:
Manipulation and expression of Recombinant DNA (một dạng lab manual cho sinh viên năm 2-3 của Mỹ). Giải thích cặn kẽ các quy trình cơ bản của biểu hiện gene (mặc dù lab ở VN thì làm hơi khác một tí)
Đọc lý thuyết thì nên đọc cuốn: Principles of DNA manipulation. Rất chuẩn và phù hợp cho sinh viên SHPT năm cuối.
Tất cả sách trên đều có thể search và download ở: gigapedia.org

 

[Nguyễn Phước Hùng]

Em hiểu thiết kế vector chuyển gen thế này:
- Phân lập được 1 gen mình quan tâm,
- Insert đoạn gen đó vào vector chuyển gen đã được công bố ( VD R1000...) bằng cách cùng xử lý với 2 RE rồi sau đó ligate.
Sơ sơ là như thế nhưng em không hiểu là khi xử lý vector với 2 RE thì sẽ cắt vector ở chính xác 2 điểm mình quan tâm ( vì đã công bố chính xác các vị trí cắt) còn xử lý đoạn gen của mình thì làm sao biết chắc chắn khi ligate sẽ được đầy đủ gen (tức là có đủ start codon và stop codon)
Khó quá. Anh chị có kinh nghiệm bảo em nhé.

Cái này gọi là kỹ thuật tao tác trên gene, như bác Lương nói đây mà, cái bạn nêu ra đơn giản chỉ là quy trình dòng hóa cơ bản.

Cut bằng RE, PCR và sequencing sẽ biết gene có đầy đủ và chính xác hay không thôi!

 

[xuhui1990]

Theo tôi hiểu thì bạn này đang thắc mắc về lý thuyết (không hiểu cắt thế rồi gắn vào có đúng frame, gene nên có start codon của bản thân nó hay không...v.v)
Bạn rõ ràng chưa đụng dao đụng kéo. Nếu muốn biết thêm về thực hành thì có thể đọc các cuốn này trước:
Manipulation and expression of Recombinant DNA (một dạng lab manual cho sinh viên năm 2-3 của Mỹ). Giải thích cặn kẽ các quy trình cơ bản của biểu hiện gene (mặc dù lab ở VN thì làm hơi khác một tí)
Đọc lý thuyết thì nên đọc cuốn: Principles of DNA manipulation. Rất chuẩn và phù hợp cho sinh viên SHPT năm cuối.
Tất cả sách trên đều có thể search và download ở: gigapedia.org

Em đã down được cuốn Principles of Gene manipulation, họ trình bày rất khoa học và dễ hiểu.
Thank anh Lương nhiều nhé

 

[ruby24h]

Theo tôi hiểu thì bạn này đang thắc mắc về lý thuyết (không hiểu cắt thế rồi gắn vào có đúng frame, gene nên có start codon của bản thân nó hay không...v.v)
Bạn rõ ràng chưa đụng dao đụng kéo. Nếu muốn biết thêm về thực hành thì có thể đọc các cuốn này trước:
Manipulation and expression of Recombinant DNA (một dạng lab manual cho sinh viên năm 2-3 của Mỹ). Giải thích cặn kẽ các quy trình cơ bản của biểu hiện gene (mặc dù lab ở VN thì làm hơi khác một tí)
Đọc lý thuyết thì nên đọc cuốn: Principles of DNA manipulation. Rất chuẩn và phù hợp cho sinh viên SHPT năm cuối.
Tất cả sách trên đều có thể search và download ở: gigapedia.org

Cám ơn anh nhiều, nhờ 2 cuốn đó muk em vở lẽ ra nhiều điều. Truớc học cái môn này cứ u u cạc cạc, chẳng hiểu gì hết trơn. 2 cuốn sách rất hay, mỗi tội tiếng Anh ko giỏi nên đọc hơi đuối 1 tý.