Tách chiết DNA đậu tương

[Trần Thu Thảo]

Em chào mọi người ạ! Hiện e đang làm bài khoá luận về đa dạng di truyền trên đối tượng đậu tương đen. Tuy nhiên em gặp khó khăn ngay trong bước đầu tiền là tách chiết DNA. Em sử dụng quy trình sau ạ:
- 0,2g mẫu lá được nghiền nhỏ và bsung 800ul CTAB 2x ủ 65 độ C trong 60p.
- bsung 700ul 24:1 và lắc đều ở nhiệt độ phòng
- ly tâm 13000v/p:10p và thu dịch nổi,
- Bsung Isopropanol ủ ở -20 độ C từ 30-60p
- ly tâm 13000v/p: 15p, loại bỏ dịch. Thu cặn
- bsung 1ml cồn 70% và ly tâm 13000v/p:5p. Lặp lại 2 lần. Lần cuối là ly tâm trong 1p rồi loại bỏ nốt dịch thừa
- phơi khô Dna và bsung TE/ Nc cất khử ion.
Vấn đề e gặp phải là cặn dna thu được có màu nâu vàng tuỳ theo từng mẫu mà mức độ màu đậm nhạt khác nhau. Tiến hành đo OD thì vẫn cho kết quả tương đối ổn từ 1,7-2,1. Nhưng khi PCR và điện di thử thì không xuất hiện băng vạch. Có thể là do lượng Rna và pr chưa được loại bỏ hết.
Em đang chuẩn bị và thay thế 24:1 bằng 25:24:1 xem kết quả có thay đổi gì không?
Trong nhóm có ai làm và gặp vấn đề như em thì có thể cho em xin một vài gợi ý và lời khuyên được không ạ

 

[cfareast]

Xử lý nguyên liệu lá có đúng ko? bột phải nghiền N2 hoặc hạt glass bead, cứ làm theo protocol. Bổ sung proteaseK mà ủ 1h.
Sau khi có tủa izopropanol (ít cũng dc), chỉ hòa trong ít đệm (30-50uL), và điện di 10-15ul, đổ gel mỏng vừa đủ cho rõ.
Nhuộm ethidium bromide 10 phút cho rõ. Băng chạy trước có thấy smear gì không? ARN gì không?