các bạn có thể dịch ra tieng việt giùm minh duoc ko,thank nhiêu nhieu!!!

Status
Not open for further replies.

phitinh

Junior Member
INTRODUCTION
The technique of in vitro placental or ovular pollination can be used for
production of interspecific and intergeneric hybrids (Zenkteler 1980). It can help
overcome crossing barriers to interspecific hybridization (Ondřej et al. 2002).
Interspecific hybridization is an important research area in the genus Cucumis
because of the possibility of transferring the genes for resistance to various diseases
from wild Cucumis to the cucumber (Cucumis sativus L.) genome. For successful
transfer of these genes, the use of some in vitro techniques has been suggested
(Lebeda et al. 2007).
The first experiment of direct pollination of ovules was made by Kanta and
Maheswari (1963) with some species of Papaveraceae. The whole process of sexual
reproduction was observed. Well-developed seedlings were obtained after in vitro
intraspecific pollination of Cichorium intybus L. by Castano and De Proft (2000), too.
Zenkteler et al. (2005) used intergeneric in vitro pollination of Melandrium album and
Lychnis coronaria and hybrid plants were observed.
The successful use of in vitro pollination has not yet been reported in the genus
Cucumis. Manipulation with pollen and microspores of C. sativus has been tested
(isolation procedures, viability tests, germination, maturation) (Vižintin and Bohanec
2004). Some attempts at in vitro pollination between C. sativus and C. melo were
made, but no hybrid plants were observed and only calluses were obtained (Ondřej et
al. 2002).
1Cucurbitaceae 2008, Proceedings of the IXth EUCARPIA meeting on genetics and breeding
of Cucurbitaceae (Pitrat M, ed), INRA, Avignon (France), May 21-24th, 2008
360
The main aim of this study was to optimize the isolation of C. sativus and
Cucumis melo pollen grains and use them for in vitro pollination of C. sativus ovules.
MATERIALS AND METHODS
Plant material
Two accessions of Cucumis species were used for testing the viability of pollen grains
and in vitro pollination (C. sativus – CS; C. melo – CM) (C. sativus- ‘Stela F1’, CZ
09H3900744; C. melo – PMR, CZ 09H4000596, CZ 09H4000597, CZ 09H4000599;
donor RICP). The plant material originated from the vegetable germplasm collection
of the Research Institute of Crop Production (RICP, Prague), Department of Gene
Bank, at Olomouc, Czech Republic (Web site: <www.vurv.cz/>, part databases,
EVIGEZ). The plants were cultivated in a glasshouse (25°C/15°C day/night) at the
Department of Botany, Palacký University, Olomouc, Czech Republic.
Methods of isolation pollen grains
Immature male flowers of CS and CM were sterilized (1 min in 70 % ethanol,
10 min in 2.5 % chloramine, three times rinsed in sterile water) and cultivated on ½
MS medium (Murashige and Skoog 1962) at 25oC in the dark for 3 days. Pollen
grains were isolated from anthers directly or by one of three centrifugation techniques
(Tab. 1). Three liquid isolation media used for centrifugation were compared: NLN
(modified NLN 13 solution; Lichter 1981), YST [modified YST solution; Ondřej et
al. (2002)], and VB [modified VB solution; Vižintin and Bohanec (2004)]. The
viability of the isolated pollen grains was evaluated immediately after culture on YS
medium and established using an Olympus BX60 fluorescent microscope, with BW
filter and fluorescein diacetate stain.
Table 1. Methods for isolation of pollen grains.
Designation Description of isolation methods
“a” pollen grains were isolated by squeezing anthers with a glass rod in
isolation media; filtration; three times centrifugation (900 rpm, 10-5-5
min)
“b” pollen grains were isolated by squeezing anthers with a glass rod in
isolation media; centrifugation (500 rpm, 5 min); filtration;
centrifugation (1000 rpm, 3 min)
“c” pollen grains were isolated from anthers chopped with a razor blade in
isolation media; centrifugation (500 rpm, 5 min); filtration;
centrifugation (1000 rpm, 3 min)
“d” pollen grains were isolated directly from anthers (transferred from
anthers directly on or to media )
In vitro culture and in vitro pollination
Immature female flowers of C. sativus (CS) were sterilized and cultured in the
same way the male flowers were. The mature female flowers were then excised in
aseptic conditions and ovules were transferred onto solid media [CP medium: Castano
and De Proft (2000), and YS medium: Ondřej et al. (2002)]. Isolated pollen grains
361
were transferred on and around ovules. In the case of directly isolated pollen grains,
they were cultivated in liquid isolation media in addition (NLN, YST, VB). The Petri
dishes with ovules and pollen grains were cultured for 2 days at 25oC in the dark, and
then fertilized ovules were transferred onto two types of media supporting
embryogenesis (CW medium, GA medium; Skálová et al. 2007). The success of in
vitro pollination was evaluated. Two levels of regeneration were described: green
ovules (the ovules became green and grown) and calluses (max. 2 mm length; Fig. 1).
Figure 1. Developed calluses after in vitro pollination, C. sativus × C. sativus (a, c, d)
and C. sativus × C. melo (b).
RESULTS AND DISCUSSION
The results are summarized in Table 2 and in Figures 2 and 3. No large
differences in pollen grain viability were observed among centrifugation techniques.
The highest viability was observed using C. sativus pollen grains in combination with
isolation medium VB and method “c” (79 %). Direct isolation showed better results
(92 % using C. sativus pollen grains on CP medium). Pollen grains of C. melo had
lower viability (for centrifugation, 68 % in isolation medium NLN and method “a”;
for direct isolation 79 % on CP medium). As ovules of C. sativus became grown and
green after in vitro pollination, this was considered as the first level of regeneration.
The highest level of regeneration was formation of callus. The same results were
obtained by Ondřej et al. (2002). The higher regeneration was observed with in vitro
pollination between C. sativus and C. melo (33 % green ovules and 11 % calluses).
The values for regeneration of C. sativus × C. sativus were lower (20 % green ovules
and 9 % calluses). Direct isolation of pollen grains offered better results again (C.
sativus × C. sativus 36 % green ovules and 3 % calluses; C. sativus × C. melo 39 %
green ovules and 6 % calluses). The positive results with directly extracted pollen
grains were also observed by Castano and De Proft (2000). They obtained seedlings
after in vitro pollination in C. intybus.
Table 2. Summary of number, viability and regeneration success of pollen grains.
Pollen grains of
Cucumis spp./
Type of isolation
C. sativus /
centrifugation
C. sativus /
directly
C. melo /
centrifugation
C. melo /
directly
No. of isolated pollen
grains
540 450 450 450
Average viability (%) 72 86 61 73
Average regeneration
(%)
29 39 44 45
362
The major influence on viability of pollen grains was the condition of donor
plants. No strong influence of different centrifugation procedures was observed on the
viability of pollen grains. On the other hand, direct isolation was more favorable for
pollen grains than using centrifugation. The most positive influence on developing
ovules and embryos was medium CP. The results of Vižintin and Bohanec (2004)
showed that the pollen germination rate is greatly influenced by different factors
(genotypes of accessions, media composition, temperature, etc.). Further
manipulation of pollen grains could bring positive results in in vitro pollination
procedures.
a
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
120
CS/NLN
CS/YST
CS/VB
CM/NLN
CM/YST
CM/VB
Cucumis spp. / Isolation medium
Viability of pollen grains (%)
Method "a"
Method "b"
Method "c"
b
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
120
CS/YS
CS/CP
CS/NLN
CS/YST
CS/VB
CM/YS
CM/CP
CM/NLN
CM/YST
CM/VB
Cucumis spp./cultivation medium
Viability of pollen grains (%)
Figure 2. Viability of pollen grains isolated by centrifugation (a) and directly (b).
363
a
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
200
CS/NLN
CS/YST
CS/VB
CM/NLN
CM/YST
CM/VB
CS/NLN
CS/YST
CS/VB
CM/NLN
CM/YST
CM/VB
Cucumis spp./isolation medium
Regeneration (%)
Method "c"
Method "b"
Method "a"
YS medium CP medium
b
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
CS/YS
CS/CP
CS/NLN
CS/YST
CS/VB
CM/YS
CM/CP
CM/NLN
CM/YST
CM/VB
Cucumis spp./cultivation medium
Regeneration (%)
Regeneration
(calluses)
Regeneration
(green ovules)
Figure 3. Regeneration (%) after in vitro pollination in Cucumis spp., pollen grains
isolated by centrifugation (a) and pollen grains isolated directly (b).
ACKNOWLEDGEMENTS
This research was supported by NAZV No. QF 4108 Ministry of Agriculture of
Czech Republic (MA CR) and the Ministry of Education of the Czech Republic No.
MSM 6198959215. Comments of Dr. H.S. Paris are acknowledged.
 
Sao không nhờ thằng translate.google.com nó dịch ra cho, đưa bao nhiêu nó cũng dịch hết:mrgreen:, hihi, tui chỉ có thể giúp bạn dịch ra tiếng Iraq thui.
 
đây sản phẩm cua google đây !! cố gắng đừng cười to và cố mà hiểu nhừng từ hay ho...

NTRODUCTION
Các kỹ thuật in vitro Placental ovular pollination hoặc có thể được sử dụng cho
interspecific và sản xuất sản phẩm intergeneric hybrids (Zenkteler 1980). Nó có thể giúp
vượt qua những rào cản để interspecific hybridization (Ondřej et al. 2002).
Interspecific hybridization là một nghiên cứu quan trọng trong khu vực gièng Cucumis
vì khả năng chuyển giao cho các gene kháng cho các bệnh
Cucumis từ hoang dã đến dưa chuột (Cucumis sativus L.) gene. Cho thành công
chuyển giao của các gene, và việc sử dụng một số kỹ thuật in vitro đã được đề nghị
(Lebeda et al. 2007).
Là người đầu tiên của thử nghiệm trực tiếp của pollination ovules đã được thực hiện bởi Bài hát và
Maheswari (1963), với một số loài Papaveraceae. Trong toàn bộ quá trình của tình dục
sao chép đã được quan sát. Well-phát triển cây giống đã thu được sau khi in vitro
intraspecific pollination của Cichorium intybus L. do Castano và Tư Proft (2000), quá.
Zenkteler et al. (2005) được sử dụng intergeneric pollination in vitro của album và Melandrium
Lychnis coronaria và lai giống cây trồng được quan sát.
Thành công trong việc sử dụng in vitro pollination chưa được báo cáo trong gièng
Cucumis. Manipulation với phấn hoa và microspores của C. sativus đã được thử nghiệm
(cô lập các thủ tục, bài kiểm tra viability, germination, maturation) (Vižintin và Bohanec
2004). Một số nỗ lực tại in vitro pollination giữa C. sativus và C. Melo được
được thực hiện, nhưng không có lai giống cây trồng được quan sát và chỉ calluses đã thu được (Ondřej et
cùng. 2002).
1Cucurbitaceae 2008, Proceedings of the IXth EUCARPIA cuộc họp về Genetics và chăn nuôi
của Cucurbitaceae (Pitrat M, ed), INRA, Avignon (Pháp), May 21-24th, 2008
360
Mục đích chính của nghiên cứu này đã được tối ưu hóa để cô lập của C. sativus và
Cucumis Melo hạt phấn hoa và sử dụng chúng cho pollination in vitro của C. sativus ovules.
Nguyên vật liệu và phương pháp
Cây trồng vật liệu
Hai accessions của loài Cucumis được sử dụng cho việc thử nghiệm các viability của hạt phấn hoa
và in vitro pollination (C. sativus - CS; C. Melo - CM) (C. sativus-'stela F1', CH Séc
09H3900744; C. Melo - PMR, CH Séc 09H4000596, 09H4000597 CH Séc, CH Séc 09H4000599;
RICP các nhà tài trợ). Cơ cấu cây trồng vật liệu có nguồn gốc từ các loại rau germplasm bộ sưu tập
Nghiên cứu của Viện Cắt sản xuất (RICP, Prague), Sở Gene
Ngân hàng, tại Olomouc, Cộng hòa Séc (trang web:, một phần cơ sở dữ liệu,
EVIGEZ). Các cây trồng được cultivated trong một Glasshouse (25 ° C/15 ° C ngày / đêm) tại
Sở Botany, Palacký Đại học, Olomouc, Cộng hòa Séc.
Các phương pháp cô lập hạt phấn hoa
Immature nam hoa của CS và đã được CM sterilized (1 phút trong 70% ethanol,
10 phút trong 2,5% chloramine, ba lần rửa trong nước khô khan) và cultivated trên ½
MS vừa (Murashige và Skoog 1962) tại khách sạn 25oC trong bóng tối cho 3 ngày. Phấn hoa
hạt giống đã được cô lập từ anthers trực tiếp hoặc bằng một trong ba centrifugation kỹ thuật
(Tab. 1). Ba nước cô lập phương tiện được sử dụng cho centrifugation được so sánh: NLN
(sửa đổi NLN 13 giải pháp; Lichter 1981), YST [YST giải pháp sửa đổi; Ondřej et
cùng. (2002)], và VB [VB giải pháp sửa đổi; Vižintin và Bohanec (2004)]. Cái
viability của cô lập hạt phấn hoa đã được đánh giá ngay lập tức sau khi văn hóa trên YS
trung và thành lập bằng cách sử dụng một Olympus BX60 fluorescent microscope, với in đen
bộ lọc và fluorescein diacetate dơ.
Bảng 1. Phương pháp cô lập của hạt phấn hoa.
Mô tả hiệu của phương pháp cô lập
"Một" hạt phấn hoa đã được cô lập bởi squeezing anthers với một cây gậy trong kính
cô lập phương tiện truyền thông; lọc; ba lần centrifugation (900 rpm, 10-5-5
phút)
"B" hạt phấn hoa đã được cô lập bởi squeezing anthers với một cây gậy trong kính
cô lập phương tiện truyền thông; centrifugation (500 rpm, 5 phút); lọc;
centrifugation (1000 rpm, 3 phút)
"C" hạt phấn hoa đã được cô lập từ anthers băm nhỏ với một trong lươi lam
cô lập phương tiện truyền thông; centrifugation (500 rpm, 5 phút); lọc;
centrifugation (1000 rpm, 3 phút)
"D" hạt phấn hoa đã được cô lập trực tiếp từ anthers (chuyển giao từ
anthers trên trực tiếp hoặc để phương tiện truyền thông)
In vitro văn hóa và in vitro pollination
Immature nữ hoa của C. sativus (CS) đã được sterilized và văn hóa trong
cùng một cách đực hoa được. Các phụ nữ trưởng thành sau đó đã được hoa trong excised
VÔ TRÙNG ovules điều kiện và được chuyển giao lên phương tiện truyền thông rắn [CP trung bình: Castano
và Tư Proft (2000), và trung YS: Ondřej et al. (2002)]. Cô lập hạt phấn hoa
361
đã được chuyển giao trên và xung quanh ovules. Trong trường hợp trực tiếp hạt phấn hoa cô lập,
cultivated họ đã được cô lập phương tiện truyền thông trong nước ngoài (NLN, YST, VB). The Petri
ovules món ăn với hạt phấn hoa và văn hóa đã được trong 2 ngày từ 25oC trong bóng tối, và
ovules mầu mỡ sau đó được chuyển giao lên hai loại phương tiện hỗ trợ
embryogenesis (CW trung bình, trung GA; Skálová et al. 2007). Sự thành công của trong
pollination vitro đã được đánh giá. Hai cấp độ tái sinh đã được mô tả: màu xanh lá cây
ovules (các ovules đã trở thành màu xanh lá cây và phát triển) và calluses (tối đa chiều dài 2 mm; Hình. 1).
Hình 1. Calluses phát triển sau khi in vitro pollination, C. sativus × C. sativus (a, c, d)
và C. sativus × C. Melo (b).
Kết quả và thảo luận
Các kết quả được tổng kết trong Bảng 2 và trong kiện 2 và 3. Không có lớn
khác biệt trong hạt phấn hoa viability đã được quan sát giữa các centrifugation kỹ thuật.
Viability cao nhất đã được quan sát bằng cách sử dụng C. sativus hạt phấn hoa kết hợp với
cô lập trung VB và phương pháp "c" (79%). Trực tiếp cô lập cho thấy kết quả tốt hơn
(92% bằng cách sử dụng C. sativus hạt phấn hoa trên trung bình CP). Hạt phấn hoa của C. đã có Melo
viability thấp hơn (cho centrifugation, 68% trong cô lập trung NLN và phương pháp "một";
trực tiếp cho cô lập trên 79% CP trung). Như ovules của C. sativus đã trở thành và phát triển
màu xanh lá cây sau khi in vitro pollination, điều này được coi như là người đầu tiên ở mức độ tái sinh.
Ở cấp cao nhất của tái sinh đã được hình thành các callus. Cùng một kết quả đã được
thu được theo Ondřej et al. (2002). Càng cao, với các quan sát đã được tái sinh in vitro
pollination giữa C. sativus và C. Melo (33% màu xanh lá cây ovules và 11% calluses).
Tái sinh cho các giá trị của C. sativus × C. sativus được thấp hơn (20% màu xanh lá cây ovules
calluses và 9%). Trực tiếp cô lập của hạt phấn hoa cung cấp các kết quả tốt hơn nữa (C.
sativus × C. sativus 36% màu xanh lá cây ovules và 3% calluses; C. sativus × C. Melo 39%
ovules màu xanh lá cây và 6% calluses). Những kết quả tích cực trực tiếp với trích xuất phấn hoa
hạt cũng đã được quan sát do Castano và Tư Proft (2000). Họ có được cây giống
sau khi in vitro pollination trong C. intybus.
Bảng 2. Tóm tắt về số lượng, viability và tái sinh thành công của các hạt phấn hoa.
Hạt phấn hoa của
Cucumis spp. /
Loại hình cô lập
C. sativus /
centrifugation
C. sativus /
trực tiếp
C. Melo /
centrifugation
C. Melo /
trực tiếp
Số cô lập phấn hoa
hạt
540 450 450 450
Viability trung bình (%) 72 86 61 73
Trung bình tái sinh
(%)
29 39 44 45
362
Chủ yếu ảnh hưởng về viability của hạt phấn hoa đã được các điều kiện của nhà tài trợ
cây trồng. Không có ảnh hưởng mạnh mẽ của các thủ tục khác nhau centrifugation quan sát được trên
viability của hạt phấn hoa. Mặt khác, trực tiếp đã được cô lập thêm thuận lợi cho
hạt phấn hoa hơn bằng cách sử dụng centrifugation. Trong hầu hết các ảnh hưởng tích cực vào việc phát triển
ovules và phôi thai đã được trung CP. Kết quả của Vižintin và Bohanec (2004)
cho thấy các phấn hoa germination tỷ lệ là rất nhiều ảnh hưởng bởi các yếu tố khác nhau
(genotypes của accessions, phương tiện truyền thông, bổ sung, nhiệt độ, vv). Xa hơn
manipulation của hạt phấn hoa có thể mang lại kết quả tích cực trong in vitro pollination
thủ tục.
a
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
120
CS / NLN
CS / YST
CS / VB
CM / NLN
CM / YST
CM / VB
Cucumis spp. / Violation trung
Viability của hạt phấn hoa (%)
Phương pháp "một"
Phương pháp "b"
Phương pháp "c"
b
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
120
CS / YS
CS / CP
CS / NLN
CS / YST
CS / VB
CM / YS
CM / CP
CM / NLN
CM / YST
CM / VB
Cucumis spp. / canh trung
Viability của hạt phấn hoa (%)
Hình 2. Viability của hạt phấn hoa cô lập bởi centrifugation (a) và trực tiếp (b).
363
a
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
200
CS / NLN
CS / YST
CS / VB
CM / NLN
CM / YST
CM / VB
CS / NLN
CS / YST
CS / VB
CM / NLN
CM / YST
CM / VB
Cucumis spp. / cô lập trung
Tái sinh (%)
Phương pháp "c"
Phương pháp "b"
Phương pháp "một"
YS trung bình CP trung
b
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
CS / YS
CS / CP
CS / NLN
CS / YST
CS / VB
CM / YS
CM / CP
CM / NLN
CM / YST
CM / VB
Cucumis spp. / canh trung
Tái sinh (%)
Tái sinh
(calluses)
Tái sinh
(màu xanh lá cây ovules)
Hình 3. Tái sinh (%) sau khi in vitro pollination trong Cucumis spp., Hạt phấn hoa
cô lập bởi centrifugation (a) và hạt phấn hoa cô lập trực tiếp (b).
LỜI CÁM ƠN
Nghiên cứu này đã được hỗ trợ bởi NAZV số QF 4108 của Bộ Nông nghiệp
Cộng hòa Séc (MA CR) và Bộ trưởng Bộ giáo dục của Cộng hoà Séc số
MSM 6198959215. Các ý kiến của Tiến sĩ H.S. Paris được công nhận.
 
Status
Not open for further replies.

Facebook

Thống kê diễn đàn

Threads
11,715
Messages
71,609
Members
55,905
Latest member
prozhecartwf
Back
Top