Mình có chút vấn đề với nuôi cấy tế bào MDCK, các bạn xem giúp với

Quách Thu Hương

Junior Member
Mình hiện đang làm kĩ thuật microneutralisation với tế bào MDCK. Tài liệu yêu cầu là tế bào đó cần phải confluent từ 70-95% mà không được vượt ngưỡng.

Trong quá trình nuôi cấy, mình phát hiện có hiện tượng thế này.
Khi mới lấy lần đầu tiên từ tế bào lưu trữ (-80C) ra và nuôi cấy trong môi trường cDMEM (FCS 10%) thì tế bào phát triển rất đẹp (từ sáng đến chiều là confluent). Sau đó mình cấy truyền sang môi trường mới, ủ ấm 37C khoảng 2 ngày thì tiếp tục confluent 95%.

Mình cấy truyền sang môi trường mới, giảm FCS từ 10% xuống 5% hi vọng để 2 ngày qua thứ 7 chủ nhật để thứ 2 đến cấy thì phát hiện ra tế bào chết tương đối ( khoảng 20%).

Mình tiếp tục cấy truyền sang chai cấy mới, thay môi trường mới (FCS 10%) thì thấy tế bào mọc lên với hình dạng không bình thường. Thông thường có dạng tam giác nhưng giờ xuất hiện cả hình bầu dục, hình vuông, có những hạt li ti màu đen và không confluent được (dù mình tiếp tục ủ 37C trong 2 ngày).

Mình tìm cách cấy truyền tiếp nhưng kết quả vẫn như vậy. Mình chưa hiểu nguyên nhân tại sao lại có hiện tượng như vậy. Hiện mình đã cấy lại từ nguồn stock mới nhưng mình không biết có cách nào tránh hiện tượng vậy không ? Mong nhận được ý kiến của các bạn.
 
Hiện tượng thì giống bị nhiễm lắm rồi. Hạt li ti màu đen thì về lý thuyết có khả năng nhiễm bacteria. Trước khi thaw tế bào mới nên lau hood và tủ ủ thật kỹ nếu không sẽ nhiễm cả tế bào mới. Nếu sau khi bị starve trong môi trường 5% tế bào mới chết thì nên quăng môi trường đấy đi và pha môi trường mới. Tớ chẳng biết gì hơn đâu, đấy là những gì được dạy vì tuần trước lab mình nghi là bi nhiễm, lau chùi mọi thứ láng coóng lên thì hóa ra là chả nhiễm nhiếc gì. Nhưng tế bào của tớ starve môi trường 2% vẫn sống nhăn răng, về 10% 1 cái là béo ú cả lũ... Nói chung bạn nên quăng hết những thứ cũ đi, chỉ dùng đồ mới và lau hết cửa nẻo bằng alcohol xem thế nào.
 

Facebook

Thống kê diễn đàn

Threads
11,715
Messages
71,609
Members
55,905
Latest member
prozhecartwf
Back
Top