Vector biểu hiện ở tế bào động vật

[Nguyễn Ngọc Lương]

Cho tôi hỏi ở sau cái promoter của CMV thì lại có một cái promoter của T7, với chức năng là: in vitro transcription in the sense orientation.
Vậy chính xác vai trò của nó là gì? Tại sao cần nó?
Còn thằng f1 ori: rescue single strand DNA. Tại sao cần "rescue" sDNA? Cám ơn.

 

[Vũ Hải Chi]

Vector của bác sử dụng cho tế bào động vật, theo em hiểu T7 pro được dùng để biểu hiện gen sơ bộ, kiểm tra trước trong E. coli chẳng hạn. Giống như phage, với F1 ori ta có thể tạo ra DNA mạch đơn, thường sử dụng trong việc tạo đột biến.

 

[Nguyễn Xuân Hưng]

Vector của bác sử dụng cho tế bào động vật, theo em hiểu T7 pro được dùng để biểu hiện gen sơ bộ, kiểm tra trước trong E. coli chẳng hạn. Giống như phage, với F1 ori ta có thể tạo ra DNA mạch đơn, thường sử dụng trong việc tạo đột biến.

Cái sau thì đúng rồi. Cái đầu thì không đúng đâu.

T7 dành cho in vitro transcription tức dùng cho các hệ thống cell free expression.

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Đã biết T7 dùng để làm gì. Ví dụ trong competitor PCR, hoặc làm probe...v.v (in vitro transcription)
Cái F1 cũng đã biết của con nào (M13 chẳng hạn). Nhưng nó gọi là single strand rescue chứ không phải chỉ là sợi đơn không. Chữ rescue này có lẽ là phục hồi sợi đôi chẳng hạn. Bạn Chi cho biết rõ thêm được không?

 

[Vũ Hải Chi]

Đã biết T7 dùng để làm gì. Ví dụ trong competitor PCR, hoặc làm probe...v.v (in vitro transcription)
Cái F1 cũng đã biết của con nào (M13 chẳng hạn). Nhưng nó gọi là single strand rescue chứ không phải chỉ là sợi đơn không. Chữ rescue này có lẽ là phục hồi sợi đôi chẳng hạn. Bạn Chi cho biết rõ thêm được không?

1. Chuyển vector có f1 ori vào E. coli (có F' epi)
2. Gây nhiễm E. coli bằng phage phù hợp
3. Nuôi E. coli để tổng hợp ssDNA => tách
4. Tạo đột biến, thường sử dụng primer