Tách chiết DNA & RNA

[Cao Xuân Hiếu]

Mọi ng có biết lý do tại sao khi tách chiết DNA thì dùng phenol bão hòa Tris trong khi tách RNA lại dùng phenol acid ?

 

[Nguyễn Xuân Hưng]

Mọi ng có biết lý do tại sao khi tách chiết DNA thì dùng phenol bão hòa Tris trong khi tách RNA lại dùng phenol acid ?

Có bọn nó tách đồng thời RNA, DNA và protein và chỉ cần dùng 1 loại phenol thôi bác.

Còn khi tách hai loại RNA và DNA riêng rẽ lại dùng 2 loại phenol bão hòa khác nhau thì theo bác tại sao?

 

[Vũ Hải Chi]

Khi tinh sạch:
1. Protein bị biến tính và tủa bởi phenol => protein nằm ở bề mặt phân pha phenol-nước.
2. DNA bị hòa tan vào phenol acid, nên phenol pH>7,8 được dùng để tinh sạch DNA => DNA nằm trong pha nước.
3. RNA không hòa tan trong phenol pH 4,5 => RNA vẫn nằm trong pha nước, DNA tồn tại trong pha phenol nhiều hơn so với pha nước.

 

[Cao Xuân Hiếu]

Khi tinh sạch:
1. Protein bị biến tính và tủa bởi phenol => protein nằm ở bề mặt phân pha phenol-nước.
2. DNA bị hòa tan vào phenol acid, nên phenol pH>7,8 được dùng để tinh sạch DNA => DNA nằm trong pha nước.
3. RNA không hòa tan trong phenol pH 4,5 => RNA vẫn nằm trong pha nước, DNA tồn tại trong pha phenol nhiều hơn so với pha nước.

Theo Chi, sự khác biệt về tính chất vật lý nào khiến cho DNA tan trong phenol acid còn RNA thì ko? Có thể tách RNA = phenol bão hòa Tris k?

 

[gapo_ti_hihi]

Cho em hỏi mọi người thường pha phenol axit để tách RNA cụ thể như thế nào vậy ạ? Em có đọc được một cách đó là:
-Sau khi hấp 65 độ C lọ phenol (khoảng 500g)để phenol hóa lỏng, thì bổ sung 100mL nước cất vô trùng, không chứa nuclease vào.
-Để yên một thời gian cho nguội.
- Bổ sung tiếp 100mL nước cất vô trùng, không có nuclease vào,
- Khi trên bề mặt phenol còn một lớp nước thì dừng lại, phenol đã bão hòa.
1/ Em không biết có ổn không?
2/ Nếu em vẫn dùng Tris-HCl (dùng khi tách DNA) nhưng đã được chỉnh pH=4 để đem pha với phenol thì liệu có vấn đề gì không nhỉ ?