duoi day la cong dung cua cac hoa chat su dugn trong ly trich ADN
Tris-HCl pH 8-8,6 duy trì pH phù hợp có tác dụng ức chế hoạt động của
những enzyme phân hủy DNA như enzyme DNase là enzyme hoạt động ở pH nhỏ
hơn hoặc bằng 7.
- EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid), thường được dùng để hòa tan
những phức chất trầm hiện, có khả năng cô lập những ion kim loại như Ca2+, Fe3+.Sau khi nối với EDTA những ions kim loại vẫn còn trong dung dịch nhưng
bị bất hoạt. EDTA có tác dụng ức chế những enzyme phân hủy DNA.
- Sodium acetat. Muối có vai trò kết hợp với ethanol 100% kết tủa và rửa
sạch DNA, bảo vệ DNA.
- CTAB (cetyltrimethylammonium bromide, hexadecyltrimethylammonium
bromide). Chất tẩy cation, sát trùng hiệu quả với vi khuẩn, nấm do làm hòa tan
màng tế bào, biến tính protein. Khi dung dịch ở nồng độ muối cao (≥ 1,4MNaCl)
thành lập phức hợp với protein, polysaccharide, polyphenol, DNA. Phức hợp
CTAB-DNA tồn tại ở trạng thái hòa tan. Khi nồng độc muối nhược trương (≤0,5M
NaCl) DNA được phóng thích. Sau đó DNA bị hòa tan và CTAB bị rửa trôi bởi
ethanol
70%; (Phức hợp CTAB-polysaccharide kết tủa. Phức hợp này sau đó được
tách ra khỏi dung dịch bằng hỗn hợp chloroform – isoamyl alcohol).
- Hổn hợp Chloroform-isoamylalcohol (24-1) tách DNA khỏi protein và
những phức chất polycaccharide.
- 2-mercaptoethanol (ß-mercaptoethanol, BME, 2BME or β-met) giảm cầu
nối disulfide và hoạt động như chất chống oxid hóa sinh học, ức chế quá trình oxi
hóa. Có tác dụng phá vỡ màng nhân, bảo vệ DNA khỏi những quinone, disulfite,
peroxi-dase, polyphenoloxydase.
- Ethanol 100% để kết tủa DNA, rửa sạch DNA. Có thể gây hại cho DNA do
vậy phải kết hợp với muối.
- Ethanol 70% để rửa sạch DNA. Không gây hại cho DNA do ở nồng độ
thấp.
- Lysozym (nếu có) là chất tiệt trùng do tính tẩy phá vở màng tế bào. Triton
X-100 có tách dụng ly giải (lysis) tế bào. Nồng độ Triton X-100 thường là 0,1%
dung dịch Triton X-100 là đủ, tuy nhiên có thể sử dụng đến 0,5% mà không ảnh
hưởng đến DNA hoặc hầu hết enzymes phân lập. Trường hợp sử dụng chung với
Proteinase K nồng độ dung dịch Triton X-100 là 1%.
- Proteinase K là một serine protease không đặc biệt, được sử dụng để chiết
xuất và tinh sạch DNA động vật hữu nhủ, proteinase K cũng được dùng để chiết
xuất RNase và làm bất hoạt nuclease (ribonuclease RNAse và Deoxyribonuclease
Dnase). Để hoạt động có hiệu quả hơn Proteinase K thường được duy trì trong sự
hiện diện của SDS, EDTA và urea. Proteinase K thường được cho vào dung dịch
ly giải trước khi sử dụng.
