Sau khi cắt plasmid bằng enzym giới hạn phải làm gì trước khi ligate?

[ngaytho]

Em là thành viên mới. Lời đầu tiên em muốn nói là cảm ơn tất cả các anh, chị và các bạn trong diễn đàn vì ở đây em có thể tìm được rất nhiều điều bổ ích.
Tiện đây, em cũng muốn hỏi một câu mà có lẽ là hơi ngớ ngẩn nhưng vì trước đây em không nghiên cứu chuyên ngành thực nghiệm này do ra trường đi làm lại phải làm về nó. Vì vậy em mong mọi người hết sức giúp đỡ.
Em băn khoăn sau khi cắt plasmid hay đoạn DNA mong muốn bằng enzym giới hạn thì em phải làm cách nào để loại bỏ enzym đi trước khi tiến hành ligate ạ?
Các anh chị có thể nói cụ thể cho em được không ạ? Em xin cảm ơn ạ.

 

[Nguyễn Xuân Trường]

Bạn có thể chạy điện di, cắt miếng gel chứa đoạn ADN mong muốn và thôi gel để thu lại đoạn ADN. Khi chỉ cắt vector mở vòng với đoạn ADN văng ra có kích thước nhỏ thì bạn có thể tủa bằng cồn để thu lại đoạn ADN bạn cần.

 

[ngaytho]

Chào tiền bối ạ, em K50A. Cảm ơn anh đã giải thích một cách đơn giản và dễ hiểu cho em. Hik, SHPT như là một chân trời mới và xa lạ đối với em. Nếu đụng đến vấn đề gì không biết em sẽ cố gắng diễn đạt rõ ràng và mọi người lại giúp em nha.

 

[Biologist]

Em là thành viên mới. Lời đầu tiên em muốn nói là cảm ơn tất cả các anh, chị và các bạn trong diễn đàn vì ở đây em có thể tìm được rất nhiều điều bổ ích.
Tiện đây, em cũng muốn hỏi một câu mà có lẽ là hơi ngớ ngẩn nhưng vì trước đây em không nghiên cứu chuyên ngành thực nghiệm này do ra trường đi làm lại phải làm về nó. Vì vậy em mong mọi người hết sức giúp đỡ.
Em băn khoăn sau khi cắt plasmid hay đoạn DNA mong muốn bằng enzym giới hạn thì em phải làm cách nào để loại bỏ enzym đi trước khi tiến hành ligate ạ?
Các anh chị có thể nói cụ thể cho em được không ạ? Em xin cảm ơn ạ.

Em co the mua cac "DNA purification kits" rat thuan tien. Chi can 30 phut la DNA cua Em san sang de tien hanh ligation. Neu phong thi nghiem cua Em khong co dieu kien de mua cac commercial "DNA-cleaning up kits", thi duoi day la general protocol (ma toi da su dung cach day gan 20 nam, khi con la sinh vien Cao hoc):

1) Restriction digestion + dephosphorylation
2) Agarose-gel purification
3) Phenol-chloroform extraction
4) Alcohol precipitation (Ethanol or isopropanol)

Chuc may man,

 

[ngaytho]

Cảm ơn anh David Dang đã cho em cái protocol cơ bản để tiến hành. Thực ra em vẫn chưa biết điều kiện PTN thế nào vì còn hơn 1 tháng nữa em mới chính thức bắt tay vào làm. Lab em là molecular cell biochemistry. Ông supervisor của em bảo em tìm hiểu trước thôi. Em đã đọc nhiều sách rồi nhưng vẫn không hiểu nên em lên diễn đàn để học hỏi kinh nghiệm thực tế từ mọi người đi trước với hi vọng rằng mình sẽ không bị bỡ ngỡ lúc ban đầu. Những kinh nghiệm của các anh chị sẽ làm vốn cho em sau này. Em cảm ơn lắm lắm!
Chúc anh thành công!

 

[Biologist]

Neu Em vua moi bat dau lam viec voi DNA va RNA thi duoi day la hai quyen sach co ban ma hau het cac phong thi nghiem Sinh hoc phan tu va Sinh hoc te bao o USA va France su dung. Hai quyen sach nay xuat ban tuong doi xua roi, nhung phan lon nhung dieu co ban can biet deu duoc giai thich trong cac quyen sach nay.

1) Sambrook et al., In: Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989).
2) Haymes et al. In: Nucleic Acid Hybridization, A Practical Approach, IRL Press, Washington, D.C. (1985).



Chuc Em thanh cong,

 

[ngaytho]

Hì, cảm ơn anh đã cho em hai cuốn sách trên. Em mới search được một phần liên quan đến cuốn thứ nhất, em nhận thấy rất dễ hiểu ạ, hữu ích hơn hẳn các cuốn textbook em đang đọc. Em sẽ cố gắng tìm đọc hết.
Chúc anh một ngày mới tốt lành!