Thắc mắc về PCR! help me

mnhung

Senior Member
Chào cả nhà! Mình có thắc mắc về bước final elongation trong PCR. Theo mình biết thì bước này dùng để kéo dài những sản phẩm chưa hòan thiện, nhưng nếu taq trong những chu kỳ trước không hòan thành được thì sang chu kì tiếp theo những sản phẩm này sẽ mất chỗ gắn primer nên không được khuếch đại, vậy taq kéo dài nó như thế nào? Xin mọi người chỉ giáo thêm. Mình mới vào nghề!(y)
 
Chào cả nhà! Mình có thắc mắc về bước final elongation trong PCR. Theo mình biết thì bước này dùng để kéo dài những sản phẩm chưa hòan thiện, nhưng nếu taq trong những chu kỳ trước không hòan thành được thì sang chu kì tiếp theo những sản phẩm này sẽ mất chỗ gắn primer nên không được khuếch đại, vậy taq kéo dài nó như thế nào? Xin mọi người chỉ giáo thêm. Mình mới vào nghề!(y)
Những mạch DNA đang được tổng hợp dang dở thì vẫn còn OH ở đầu 3', vì vậy Taq polymerase vẫn gắn được Nu tiếp theo vào đó. Cơ chế kéo dài primer cũng vậy thôi.
 
Những mạch DNA đang được tổng hợp dang dở thì vẫn còn OH ở đầu 3', vì vậy Taq polymerase vẫn gắn được Nu tiếp theo vào đó. Cơ chế kéo dài primer cũng vậy thôi.
OH dau 3' con va taq van bam duoc nhung mach bo sung cho no thi qua chu ki khac da ket hop voi primer khac vay taq gan nhu the nao? Minh khong hieu chinh la cho nay(y)
 
OH dau 3' con va taq van bam duoc nhung mach bo sung cho no thi qua chu ki khac da ket hop voi primer khac vay taq gan nhu the nao? Minh khong hieu chinh la cho nay(y)
Việc kéo dài cho những mạch dang dở này quan trọng là sau chu kỳ cuối cùng. Nếu bạn nhìn lại các chu kỳ nhiệt thì sẽ thấy giai đoạn kéo dài cuối cùng này thực chất là thêm vào giai đoạn kéo dài của chu kỳ cuối.
 
Theo mình nghĩ thì cái bước kéo dài sau cùng này hình như không cần thiết, không có cũng chẳng sao.
 
Chào cả nhà! Mình có thắc mắc về bước final elongation trong PCR. Theo mình biết thì bước này dùng để kéo dài những sản phẩm chưa hòan thiện, nhưng nếu taq trong những chu kỳ trước không hòan thành được thì sang chu kì tiếp theo những sản phẩm này sẽ mất chỗ gắn primer nên không được khuếch đại, vậy taq kéo dài nó như thế nào? Xin mọi người chỉ giáo thêm. Mình mới vào nghề!(y)

Toàn đọc tiếng việt, chưa biết cái này (final elongation) là cái nào? Có phải là cái bước 10 phút (72oC x 10 phút ở phản ứng PCR thông thường) cuối không nhỉ? Nếu là nó, đơn giản chỉ là để cho cái chức năng sửa lỗi của thằng Polymerase làm việc một cách hiệu quả thôi. Còn trước đó thì nó làm tính năng tổng hợp rồi.
Chẳng biết đúng không nữa, type bừa vào. anh chị em nào thấy làm mà sai, mua máy của bên em mà xài nhé :dance::mrgreen:
 
Chào cả nhà! Mình có thắc mắc về bước final elongation trong PCR. Theo mình biết thì bước này dùng để kéo dài những sản phẩm chưa hòan thiện, nhưng nếu taq trong những chu kỳ trước không hòan thành được thì sang chu kì tiếp theo những sản phẩm này sẽ mất chỗ gắn primer nên không được khuếch đại, vậy taq kéo dài nó như thế nào? Xin mọi người chỉ giáo thêm. Mình mới vào nghề!(y)

Đúng là người mới vào nghề có suy nghĩ hay thật!
 
Các bạn cho mình hỏi tại sao khi hạ nhiệt độ từ 94 độ xuống nhiệt độ gắn mồi (45 - 65 độ), hai sợi bổ sung của template lại không bắt cặp với nhau mà lại để cho primer có lực gắn thấp hơn bắt cặp vào?
 
Mình có một cặp mồi nhân PCR, giờ định viết báo cáo thì chẳng biết nên gọi cái nào là forward primer, cái nào reverse primer. Bạn nào có thể giúp mình được không. Cảm ơn trước.
 
Mình có một cặp mồi nhân PCR, giờ định viết báo cáo thì chẳng biết nên gọi cái nào là forward primer, cái nào reverse primer. Bạn nào có thể giúp mình được không. Cảm ơn trước.
Theo mình thì primer nào gắn gần với mã ATG thì đó là forward primer còn cái còn lại là reverse primer:cuchuoi:
 
Tiện thể, xì-pam thêm mấy bài của bác Ho Huu Tho cho vui:

Các bạn cho mình hỏi tại sao khi hạ nhiệt độ từ 94 độ xuống nhiệt độ gắn mồi (45 - 65 độ), hai sợi bổ sung của template lại không bắt cặp với nhau mà lại để cho primer có lực gắn thấp hơn bắt cặp vào?

Cái này theo em được học là do nồng độ Template quá nhỏ so với nồng độ primer, nên việc primer bám vào template nhiều, do đó ít có cơ hội cho 2 sơi đơn của ADN bắt cặp lại với nhau hơn (dù ít, nhưng vẫn có, nên nó cũng là một lý do làm cho số lượng sản phẩm PCR tạo thành vẫn không thể bằng A x 2^n, chắc bác còn nhớ, bác nhở ^_^ ^_^).


Mình có một cặp mồi nhân PCR, giờ định viết báo cáo thì chẳng biết nên gọi cái nào là forward primer, cái nào reverse primer. Bạn nào có thể giúp mình được không. Cảm ơn trước.

Việc gọi tên thì đơn giản, bác thích cái nào cũng được mà.
Nhưng theo kinh nghiệm của em, thì em toàn blast trên NCBI, hoạc align với đoạn trình tự mà mình dựa vào đấy để thiết kế mồi (hay là làm ngay khi thiết kế rồi), dựa vào sự bắt cặp của primer (query) với đoạn trình tự so sánh (subject) mà đặt tên, thằng nào bắt cặp kiểu Plus / Plus thì cho nó cái tên là forward, thằng nào bắt cặp kiểu Minus / Plus thì cho nó cái tên là Reverse.
Túm lai, theo em thì dựa vào trình tự của sợi ADN dương mà đặt tên cho primers của bác thôi.

:spam: thêm được phát nữa, sướng sướng sướng...
 

Facebook

Thống kê diễn đàn

Threads
11,649
Messages
71,550
Members
56,918
Latest member
sv368net
Back
Top