Ai giúp hộ tính hoạt độ Enzym dựa vào phản ứng biuret cái nhỉ

[phungnham]

mình đang làm về chymopapain trong nhựa đu đủ nhưng mà chưa tìm đc cách tinh' hoạt độ Protein theo phương pháp biuret.
minh sử dung cơ chất là casein, tính theo đơn vị nKat nhưng mà cứ theo định nghĩa mà tính thì vô lý ko chiu đc
Ai bít chỉ giùm cái.mình nghĩ mãi hok ra


À.Mình tính vầy ko bit đúng ko?
Chỉ giáo hộ cái nha
HđP = m(Enzym-mg).10^9.23600 / m(Protein bị thủy phân-g).t(thời gian-s).209

trong đó 23600: KLPT của casein
209: Số liên kết peptid của casein( vì định nghĩa là cơ chất đặc hiệu chỉ có 1 loại liên kết peptid mà_thầy mình bảo vậy)

 

[rubik85]

mình đang làm về chymopapain trong nhựa đu đủ nhưng mà chưa tìm đc cách tinh' hoạt độ Protein theo phương pháp biuret.
minh sử dung cơ chất là casein, tính theo đơn vị nKat nhưng mà cứ theo định nghĩa mà tính thì vô lý ko chiu đc
Ai bít chỉ giùm cái.mình nghĩ mãi hok ra


À.Mình tính vầy ko bit đúng ko?
Chỉ giáo hộ cái nha
HđP = m(Enzym-mg).10^9.23600 / m(Protein bị thủy phân-g).t(thời gian-s).209

trong đó 23600: KLPT của casein
209: Số liên kết peptid của casein( vì định nghĩa là cơ chất đặc hiệu chỉ có 1 loại liên kết peptid mà_thầy mình bảo vậy)

Ko hiểu lắm tình huống của bạn.
Nhưng muốn xa'c định hoạt tính của một enzyme, bạn cần biết trước hết sản phẩm của phản ứng xúc tác đó là gì, nồng độ sản phẩm bao nhiêu. Đây là định nghĩa của hoạt tính xúc tác: "one unit of activity is defined as the amount of enzyme equivalent to release 1umol of product in one minute." Tu UI ban chuyen sang nKat dễ òm.

 

[cherry]

Phuong phap Anson dung casein hoac hemoglobin la co chat

MInh gui ban phuong phap cai tien tu phuong phap Anson (1938). Phuong phap nay co day cach tinh hoat do. Phuong phap co uu diem la rat re nhung khong nhay va rat ton thoi gian va khong dac hieu. Vi du khi ban tim thay hoat tinh protease tu nhua cay du du, co so nao ban ket luan do la hoat tinh cua chymopapain?. BAn nen noi Thay giao dung peptide MCA or AFC neu khong ban co the peptide nitroanilide ay vi no cuc nhay, nhanh va rat dac hieu.

 

[phungnham]

Cam' o'n Cherry nhiu` nhiu`.Nhưng ma` minh` vân~ mun' lam` theo biuret.
làm theo biuret thi chính xác hơn mà. với lại trường mình có người làm theo Anson rùi.Mình học khóa sau đành phải tìm lối đi mới.Ko lặp lại đc.Ai tìm đc tài liệu chi hộ mình cái nha!
Vô cùng đa tạ!

 

[cherry]

Cam' o'n Cherry nhiu` nhiu`.Nhưng ma` minh` vân~ mun' lam` theo biuret.
làm theo biuret thi chính xác hơn mà. với lại trường mình có người làm theo Anson rùi.Mình học khóa sau đành phải tìm lối đi mới.Ko lặp lại đc.Ai tìm đc tài liệu chi hộ mình cái nha!
Vô cùng đa tạ!

Biuret la phuơng phap de xac dinh ham luong protein, do mau o buoc song 540 nm thoi chu. Trong Phuong phap Anson da co bao gom roi ma. Sau khi phan ung giua Enzyme va co chat ( Casein) ban se phai ngung phan ung bang TCA, loc hoac litam de loai tua protein( casein thua khong bi thuy phan boi enzyme). Ban se thu dich trong chua polypeptides. Voi dich trong nay ban co the dung mot so phuong phap sau de xac dinh polipeptide trong dich trong sau TCA:

1. do truc tiep o buoc song 280 nm
2. lam phan ung biure
3 . xac dinh bang phuong phap Braford (voi CBB 250)
4 . Xac dinh bang Phuong phap lowry voi thuoc thu folin do o 750 nm
5 . phuong phap khac nhu BCA ....
Dua tren duong chuan ban se tinh duoc hoat do enzyme ma.

 

[phungnham]

uhm
minh` tinh' dùng biuret đo ở 540 nm để định lượng hàm lượng protein (theo đường chuẩn) rùi từ định nghĩa đơn vị Kat để tính ra.
1Kat là lượng enzym xúc tác thủy phân 1 mol cơ chất trong 1 s ở đièu kiện nhất định.
mình có khối lượng casein , khối lượng enzym,KLPT của casein nên mình cứ tính theo định nghĩa thui.tính thì vẫn ra.chỉ tội cứ thấy ko đúng làm sao ý.