Có một thắc mắc về cloning, mong các bác giải đáp giúp

[Hồ Xuân Hùng]

Em được biết, mình có thể đưa đoạn insert của mình vào vector nhân dòng rồi từ đó đưa vào vector biểu hiện. Hoặc mình có thể đưa thẳng vào vector biểu hiện luôn. Vậy thì với 2 phương pháp này có những ưu và nhược nhiểm gì khác nhau? Câu trả lời đúng và đủ ý nhất là sao hả các anh chị
Cám ơn anh chị nhiều

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Đưa thẳng: hồi xưa thì khó làm directional clone nếu đưa thẳng sp PCR vì chỉ clone bằng RE, bây giờ có Topo directional clone rồi nên đây chỉ là chuyện nhỏ
Hồi xưa đưa insert vào vector biểu hiện bằng RE nên khi chạy PCR xong TA clone vào vector tạo dòng để sau đó cắt RE cho tiện. Nhưng mà bước này lại cần gel extraction các thứ lôi thôi.
Nói chung làm kiểu nào cũng được nhưng kiểu đưa vào vector tạo dòng xong rồi đưa vào vector biểu hiện phổ biến hơn, có thể do thói quen từ xưa.

 

[mabu9669]

Em thì ko rành lắm. Nhưng theo ý em thì qua bước trung gian để đoạn gen của mình được giữ trong plasmid tốt hơn.
Kĩ thuật Topo thì em chưa biết. Anh Lương nói rõ hơn được ko? Em chĩ biết direct bằng 2 enzyme đầu dính và cũng cắt đoạn target gene bằng 2 RE này