mấy cái này của ông sv_ngheo
Có chút vấn đề với nồng độ gel, không phải cứ nồng độ gel < 1% là ảnh điện di đẹp đâu à. Nghĩ kỹ coi.
Kỹ thuật điện di- thực nghiệm
- Thread starter Nguyễn Xuân Hưng
- Start date
mấy cái này của ông sv_ngheo
Có chút vấn đề với nồng độ gel, không phải cứ nồng độ gel < 1% là ảnh điện di đẹp đâu à. Nghĩ kỹ coi.
Các bác ơi, cho em hỏi chút về dye điện di ạ. Là thế này. Bác supervisor của em bắt em đi pha dye điện di ạ (em tưởng dye thì thường có sẵn mà, mua là xong??). Bác ấy cho em công thức sau:
10 X loading buffer:
20% Ficoll 400
0.1M disodium EDTA, pH 8
1.0% sodium dodecyl sulfate
0.25% bromphenol blue
Em chẳng biết là pha thế có tốt không? Vì là để em tự dung ạ. Các bác cho em chút ít ý kiến.
___________________________________
HÃY ĐAM MÊ VÀ BIẾN NIỀM ĐAM MÊ ẤY THÀNH SỰ THẬT !
Hãy lắng nghe tiếng nói của lòng đam mê,
hãy chắp đôi cánh cho tâm hồn bay bổng;
và hãy để bài hát nào cũng được hát lên....
10 X loading buffer:
20% Ficoll 400
0.1M disodium EDTA, pH 8
1.0% sodium dodecyl sulfate
0.25% bromphenol blue
Em chẳng biết là pha thế có tốt không? Vì là để em tự dung ạ. Các bác cho em chút ít ý kiến.
___________________________________
HÃY ĐAM MÊ VÀ BIẾN NIỀM ĐAM MÊ ẤY THÀNH SỰ THẬT !
Hãy lắng nghe tiếng nói của lòng đam mê,
hãy chắp đôi cánh cho tâm hồn bay bổng;
và hãy để bài hát nào cũng được hát lên....
Thực ra dye( dung dịch nạp mẫu-Loading bufer ) thường thì có bán sẵn dạng 6X. Mình chỉ cần mua về và sử dụng thôi. Thường các công ty về sinh học phân tử trong nước như Việt Á, Khoa Thương...đều có bán và các công ty đa quốc gia nữa.
và công tức của Fesmantas là
5X)- 0.313M Tris-HCl( pH6.8 at 25 độ c)
- 10% SDS
- 0.05% bromophenol blue
- 50% glycerol
sinhvienhanoi
Senior Member
đề nghị nhưng người đua ra techinical hint phai nam chac kha nang cua minh, chu toi thay co nhan van dua ra hint nhu the nay
".....Khi load mẫu vào giếng đặt trong bể điện di thì DNA do đã hình thành liên kết yếu với bromphenol blue nên lắng nhanh xuống đáy giếng, chẳng ai phải đánh đuổi ai cả......"
Thu hoi ban DNA lien ket voi bromphenol blue nho lien ket hoa hoc nao vay, va tac gia nao discover dieu do day,
De settle down your sample, nguoi ta mix probe voi mot hop chat co trong luong rieng lon hon running buffer, trong truong hon nay la glycerol (co the co cac chat khac nua) con chat mau bromphenol blue, (con goi la front dye) nguoi ta dung de biet how far the electrophoretic mobility is. Trong mot so truong hop vi du EMSA (electrophoretic mobility shift assay), o do nguoi ta can preserve protein (transciption factor ) DNA interaction thi tham tri nguoi ta omit bromphenol blue vi so (mac du chua ro do co phai nguyen nhan ko) hop chat mau nay co the interfere with the conplex.
Neu chua ro thi doc ky roi hang dua ra comment,
chu dung co noi lieu, dat biet la lam khoa hoc
xiin loi ban cho toi noi thang
".....Khi load mẫu vào giếng đặt trong bể điện di thì DNA do đã hình thành liên kết yếu với bromphenol blue nên lắng nhanh xuống đáy giếng, chẳng ai phải đánh đuổi ai cả......"
Thu hoi ban DNA lien ket voi bromphenol blue nho lien ket hoa hoc nao vay, va tac gia nao discover dieu do day,
De settle down your sample, nguoi ta mix probe voi mot hop chat co trong luong rieng lon hon running buffer, trong truong hon nay la glycerol (co the co cac chat khac nua) con chat mau bromphenol blue, (con goi la front dye) nguoi ta dung de biet how far the electrophoretic mobility is. Trong mot so truong hop vi du EMSA (electrophoretic mobility shift assay), o do nguoi ta can preserve protein (transciption factor ) DNA interaction thi tham tri nguoi ta omit bromphenol blue vi so (mac du chua ro do co phai nguyen nhan ko) hop chat mau nay co the interfere with the conplex.
Neu chua ro thi doc ky roi hang dua ra comment,
chu dung co noi lieu, dat biet la lam khoa hoc
xiin loi ban cho toi noi thang
Mình thấy có 1 cái khác biệt giữa 2 lab mình đã làm. Ở VN thường là đúc gel ngay lúc chạy. Ở lab mình hiện nay đúc hơn chục cái gel rồi cho vào hộp ngâm trong TAE buffer 1x. Lúc nào chạy thì lấy ra chạy luôn. Ở VN đặt gel vào tank rồi mới cho mẫu lên giếng. Ở đây lấy gel từ TAE buffer ra cho mẫu lên giếng rồi mới bỏ vào tank.
Về làm dye thì mình chỉ thích bỏ bromophenol blue mà không thích thêm mấy thằng lằng nhằng kia (Xylene chẳng hạn). Bromophenol blue thường chạy tương đương khoảng 300 bp trong khi mấy thằng màu kia khoảng 1kp trở lên. Khi chụp ảnh gel nhiều khi cái màu thẫm của các băng kia nó ảnh hưởng đến band của mình. Dye chỉ có bromophenol blue thì khi pha có màu xanh lá chuối, cho DNA vào đổi thành màu tím xanh.
Về làm dye thì mình chỉ thích bỏ bromophenol blue mà không thích thêm mấy thằng lằng nhằng kia (Xylene chẳng hạn). Bromophenol blue thường chạy tương đương khoảng 300 bp trong khi mấy thằng màu kia khoảng 1kp trở lên. Khi chụp ảnh gel nhiều khi cái màu thẫm của các băng kia nó ảnh hưởng đến band của mình. Dye chỉ có bromophenol blue thì khi pha có màu xanh lá chuối, cho DNA vào đổi thành màu tím xanh.
Chỗ bác để gel ngâm đó trong bao lâu? Đã có EtBr chưa? Gel mới load và chạy một vài giếng có bỏ lại đợi chạy tiếp k? Tuổi thọ bao lâu?
Lúc bỏ gel đã load mẫu vào tank thì tank có buffer chưa? Có bị trôi sample ra khỏi giếng k?
Nếu work với gel có sẵn EtBr thì làm như thế có dây bẩn linh tinh ra nhiều thứ k? Bác cảm giác có safety k?
Gel ngâm cả tháng cũng không sao. Gel không bỏ EtBr. Khi chạy vài giếng thì cắt đủ giếng để chạy còn lại vất lại vào hộp. Chạy DNA dùng gel cũ vẫn ổn như thường. Chạy kiểm tra chất lượng RNA thì thường đúc gel mới và thay đệm mới.
Khi bỏ vào tank thì tank đã có buffer. Nhìn chung là mẫu không trôi ra khỏi giếng trừ phi overload.
Một điều thú vị là lab mình chả ai xài găng tay khi làm việc với EtBr. Nói đúng hơn là vì đã có spatula xúc gel rồi nên cũng chẳng cần đeo thêm bao tay, chỉ tổ tạo cảm giác an toàn giả tạo.
Mình cảm thấy rất yên tâm vì có bà postdoc ở lab làm SHPT hơn 10 năm mà sinh 2 đứa con xinh như cún!
Khi bỏ vào tank thì tank đã có buffer. Nhìn chung là mẫu không trôi ra khỏi giếng trừ phi overload.
Một điều thú vị là lab mình chả ai xài găng tay khi làm việc với EtBr. Nói đúng hơn là vì đã có spatula xúc gel rồi nên cũng chẳng cần đeo thêm bao tay, chỉ tổ tạo cảm giác an toàn giả tạo.
Mình cảm thấy rất yên tâm vì có bà postdoc ở lab làm SHPT hơn 10 năm mà sinh 2 đứa con xinh như cún!
Ho Huu Tho
Senior Member
Mình cảm thấy rất yên tâm vì có bà postdoc ở lab làm SHPT hơn 10 năm mà sinh 2 đứa con xinh như cún!
Gửi bác Lương:
EtBr là tác nhân gây ung thư khi tiếp xúc với nó, chứ không hẳn sẽ liên quan đến 2 đứa con xinh như cún đâu ạ. Phiền bác xem lại ý này?
Lab mình làm Southern với Northern cứ gọi như là cơm bữa. Toàn dùng phóng xạ.
EtBr gây ung thư, thế tột cùng của ung thư là gì? Chả phải là đột biến tế bào mầm à
EtBr gây ung thư, thế tột cùng của ung thư là gì? Chả phải là đột biến tế bào mầm à
Ho Huu Tho
Senior Member
Lab mình làm Southern với Northern cứ gọi như là cơm bữa. Toàn dùng phóng xạ.
EtBr gây ung thư, thế tột cùng của ung thư là gì? Chả phải là đột biến tế bào mầm à
Í, là lo cho sức khỏe của bác nên mới nói thế, bác đừng để ý nếu thấy không ích lợi gì. Còn tột cùng của ung thư thì bác có thể tham khảo cái này
voh5
Senior Member
>>>> Chẳng tháy mod và Admin nhắc nhở gỉ cả nhỉ
, nửa ta nửa tây! Còn vụ tiếng ta không dấu, thế mà mỗi cái trang SNVN đều có cái nhắc nhở màu đỏ to tướng về cái "Lỗi nhỏ hay mắc", thế mới lạ chứ!!!Cái khác biệt này với em cũng đã thấy, cái chính theo em nghĩ là "Trăm hay không bằng tay quen" các bác à! Em cũng đã từng cả đúc gel + EtBr cũng như là đổ gel >> điện di >> nhuộm EtBr trong cùng một lab (ở VN) hoạc ở 2 lab khác nhau ở nước ngoài. Vấn đề chỗ nào quen thì người ta chỉ chi mình làm hoạc bắt mình làm thế thôi.
Riêng vơi gel đổ sẵn cùng EtBr, các bác có để ý là bản gel soi trên đèn UV thì phía điện cực âm (chẳng nhớ, phía đầu load mẫu í) cũng sáng hơn ở điện cực dương không các bác nhỉ? Đã có ai lý giải cái này chưa???
Ủng hộ bác món này!!! CÁi Bromophenol blue công nhận tiện ích cho trông chừng điện di ^_^.
Em cũng đã đổ gel rồi ngâm trong đệm TBE, cũng đổ gel bọc lại, cho vào tủ mát, để vài ba ngày rồi chạy điện di bình thường. Quan trọng là không làm cho cái gel bị bay hơi / mất nước đi là okie mà các bác.
Đợt này bác Thọ làm được trên 230 comment trong 1 topic riêng của bác rồi đấy à
! Cung hỷ, cung hỷ!!!
Ho Huu Tho
Senior Member
Bạn tham khảo comment này để có một phương án giải thích nhé.
Cái chủ đề này các bac biết nhiều nên nói lắm quá nhỉ. cái không biết thì không nói ra cho mọi người hiểu.
- Cho bản gel vào đệm rồi load mẫu vào.
- Nhuộm EtB vào gel đag nóng luôn.
- Nếu gấp thời gian thì đổ xong để cân bằng cho vào tủ lạnh cho nhanh đông, dùng không vấn đề.
-Thể tích mẫu load tùy: mục đích điện di (kiểm tra, thôi gel...), thể tích của giếng có thể chứa được ...
-Điện di bao nhiêu vol cũng tùy vào mục đích, kích thước sản phẩm (sản phẩm càng nhỏ thì vol nhỏ và chạy lâu hơn)
-Vị trí marker cũng tùy vào mục đích.
Cuối cùng em nghĩ rằng mấy ông làm sinh phân tử mà hỏi mấy cái ni thì kỳ cục quá.
- Cho bản gel vào đệm rồi load mẫu vào.
- Nhuộm EtB vào gel đag nóng luôn.
- Nếu gấp thời gian thì đổ xong để cân bằng cho vào tủ lạnh cho nhanh đông, dùng không vấn đề.
-Thể tích mẫu load tùy: mục đích điện di (kiểm tra, thôi gel...), thể tích của giếng có thể chứa được ...
-Điện di bao nhiêu vol cũng tùy vào mục đích, kích thước sản phẩm (sản phẩm càng nhỏ thì vol nhỏ và chạy lâu hơn)
-Vị trí marker cũng tùy vào mục đích.
Cuối cùng em nghĩ rằng mấy ông làm sinh phân tử mà hỏi mấy cái ni thì kỳ cục quá.
có lẽ bạn nên coi kỹ các vấn đề bạn vừa nêu.
vì có một số cái bạn phát biểu hơi mang tính chủ quan.
blackkeycr
Junior Member
Chào các bạn mình bên công ty Khoa học hợp nhất chuyên bán hóa chất thiết bị sinh học phân tử cho hãng Biorad. Bạn nào có nhu cầu hóa chất làm đề tài liên hệ với mình sẽ có giá ưu đãi nhé. Mong các bạn ủng hộ
Phạm Xuân Thọ
United Scientific Co.
83/10 Bach Dang, Ward 2,
District Tan Binh, Ho Chi Minh,
Vietnam,
Tel: +84 336657245
Phạm Xuân Thọ
United Scientific Co.
83/10 Bach Dang, Ward 2,
District Tan Binh, Ho Chi Minh,
Vietnam,
Tel: +84 336657245
