Cùng chia sẻ kinh nghiệm nuôi cấy tế bào động vật

[Nguyễn Thị Phương Thảo]

Chao em,

Cho chúng vào water bath. Chị không nuôi tế bào "đỏng đảnh". hehe. có điều pre-warm ở 30oC là good practice thế thôi.
Chị từng nuôi các tế bào như 3T3, RAW, MDVK, etc. để làm transfection và làm bioassay.
Có lẽ do môi trường xung quanh nơi chị nuôi cấy lúc sạch nên chị chưa bị nhiễm bacteria and fungi, dù đôi lúc cũng ẩu phết. Còn có nhiễm Mycoplasma hay không thì chị chưa có điều kiện để thử.
Chị attach cho em một phần nói về kỹ thuật cơ bản trong nuôi cấy tế bào động vật trong cuốn: "Current protocol in Cell biology" để em tham khảo thêm nhe'.

Chúc vui vẻ.

 

[Hoàng Đức Minh]

Hôm nay ngồi tra thử các dòng tế bào mới thấy chết: http://www.biotech.ist.unige.it/cldb/cname-1c.html

chị thử nghía qua cái link xem. Giờ em chả biết cái bhk 21 vẫn nuôi là có nguồn gốc từ đâu nữa, có lẽ phải hỏi giấy khai sinh của nó mới được  8) .

MDCK hay MDVK?

Hì, em mới chỉ nuôi BHK thôi, chứ còn Vero, thận khỉ tiên phát (primary monkey kidney), thận chó (mdck) thì vẫn có thể đi hỏi được.

Chả biết có quyển sách nào dạy về các thao tác kỹ thuật cơ bản trong nuôi cấy tế bào không nhỉ? Chứ em học theo kiểu truyền miệng cho nên chả biết thế nào là tiêu chuẩn, là đúng thao tác kỹ thuật cả.

 

[Võ Tấn Huân]

Có ai biết cách để xử lý khi cho trypsin vào mà tế bào một lớp nó ko bong ra để cấy chuyển lần sau ko?

hic, cho tripsin vào đợi mòn cả mắt nó chả tách gì cả, chả hiểu tại sao

Hi,

Bạn thử rửa trước các tế bào với 1x PBS hoac HBSS khoảng 30 giây tới 1 phút, sau đó cho 1x trysin/edta vào đợi khoảng 2-3 phút, tab bên hông cái plate thì các tế bào sẽ bong ra. Bạn thử xem thế nào.

 

[Hoàng Đức Minh]

PBS âm hay dương? pH bao nhiêu hả anh?

 

[Võ Tấn Huân]

1X PBS - pH khoang 6.9-7.2

 

[Huỳnh Duy Thảo]

trời ui. thế ma cũng hỏi ah.
chuyện cua cậu có thể giải thích một cách đơn giản là trýpin của ban ko còn hoạt tính nữa. he he he. trýpin co xem date ko? hoặc là pha lâu quá mà ko sử dụng nên ko còn tác dụng nữa. he he he

 

[Hoàng Đức Minh]

Bạn thử rửa trước các tế bào với 1x PBS hoac HBSS khoảng 30 giây tới 1 phút, sau đó cho 1x trysin/edta vào đợi khoảng 2-3 phút, tab bên hông cái plate thì các tế bào sẽ bong ra. Bạn thử xem thế nào.

Quy định thì là thế này rồi, cho em hỏi thêm một tí: nếu anh thử PBS - ở pH 6,9 và pH 7,2 có thấy khác nhau nhiều lắm ko?

 

[Nguyễn Phạm Minh Hoàng]

Gửi chị Trang,

Chị có thể tham khảo thêm các kỹ thuật cơ bản trong nuôi cấy tế bào động vật trong ?laboratory handbook về animall cell culture trên trang web của tổ chức ?ECACC, nó rất ?cơ bản, đơn giản và dễ đọc. Em cũng làm theo các protocol của nó. Chị cũng có thể đăng ký vào forum của nó để post các câu hỏi của chị. Nhân tiện em attach file giúp chị luôn.

Phương Thảo

Làm sao để dơload hết cả cuốn sách này hả chi? giúp em với

 

[Phan Lê Khoa]

nuôi tế bào côn trùng

chào chị Phương Trang

Em được biết chị đang nuôi tế bào côn trùng. Cho em hỏi chị nuôi tế bào đã thành dòng rồi hay nuôi tế bào sơ cấp.
Hiện em đang tiến hành nuôi sơ cấp tế bào côn trùng nhưng gặp một ít khó khăn về môi trường nuôi. Em nuôi tế bào bằng môi trường Grace's có bổ sung huyết thanh nhưng chỉ mới bám dính thôi chứ khả năng phát triển chưa tốt lắm. Em nghĩ là do môi trường, mong chị và các bạn góp ý dùm.

 

[Nguyễn Xuân Hưng]

@Khoa: tôi không có kinh nghiệm gì với tế bào côn trùng. Tuy nhiên để tìm điều kiện nuôi cấy tốt nhất thì kiểm tra các thành phần môi trường thôi. Bạn dùng đĩa nuôi cấy loại 12 giếng, sau đó kiểm tra một dải các điều kiện chất thêm vào môi trường cơ bản.

Kiểm tra xem điều kiện nào tốt nhất.

 

[sharnock]

 

[Lê Đức Dũng]

Em làm tế bào BHK, nếu vỗ sớm quá thì lớp tế bào ko bong ra hết mà nó thành từng mảng, có mảng vẫn bám vào thành chai. Lúc đó thì rất mệt, phải cho môi trường vào để lấy cái đống tế bào vừa bong ra đó, rồi tráng bằng trypsin, rồi sau đó mới láng trypsin để nó bong ra một lần nữa.

Chị Thảo làm tế bào gì mà thời gian bong chỉ khoảng 30 giây, của em phải từ 2-4 phút, để lâu hơn thì thường tế bào nó toi hết cho nên phải cho vào môi trường gấp.

Tại sao lại phải giữ môi trường ở 37 độ, em vẫn để ở nhiệt độ phòng có sao đâu? hay tế bào chị nuôi có yêu cầu gì đặc biệt .

sao không dùng thanh cọ vô trùng mà cọ cho nó bong ra la xong ! cọ xong nghieng flash lại tráng lắc cho nó dồn về đáy flash.

 

[Nguyễn Phước Hùng]

sao không dùng thanh cọ vô trùng mà cọ cho nó bong ra la xong ! cọ xong nghieng flash lại tráng lắc cho nó dồn về đáy flash.

Cái này chắc để split cells, dùng trypsin để tế bào bong ra thành những tế bào đơn sau đó mới có thể đo đếm để transfect hay cấy chuyền mới chính xác! Bác Dũng nói thế em cũng chịu, cách đó là để thu tế bào thôi bác ạ!