Các phương pháp phân tích PCR

[lqthinh]

Xin chào mọi người
Các bạn có thể tư vấn cho mình biết để phân tích PCR thành công cần trải qua các công đoạn phân tích(quá trình tiến hành) như thế nào và các loại thiết bị gì cần cho quá trình phân tích này được không?
Ví dụ mình muốn phân tích để xác định huyết thống
Cảm ơn nhiều nhiều.

Newbee

 

[viet23ht]

Tách chiết ADN
Định lượng ADN
PCR
Điện di
Đấy là 4 bước kỹ thuật để phân tích xác định huyết thống
PCR là một kỹ thuật phô tô kiểu gen cần quan tâm nên phải định lượng chính xác kiểu gen rồi mới có thể tiến hành nhân bản kiểu gen thông qua phản ứng trên máy PCR bằng cách điều chỉnh nhiệt độ tổng hợp tự động.
Định lượng thì có nhiều cách, nhưng chính xác nhất hiện nay là dùng Realtime PCR.
Hết giờ rồi, lúc khác viết tiếp nhé.

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Cho mình hỏi mỗi phản ứng real-time PCR thường tốn hết bao tiền nhỉ?
Mỗi phản ứng long-range PCR tốn tầm bao nhiêu (enzyme xịn nhất ...v.v)? Với đoạn amplicon của mình tầm 13, 15 và 27 kbp.

 

[viet23ht]

Mình chỉ chạy những đoạn dưới 400 bp, dùng goldtaq thì giá chỉ dưới 100 usd.

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Có thể mình xài TripleMaster Polymerase hoặc một kit của fermentas

 

[congchuameocd2003]

Mấy anh chị ơi, có sách nào hướng dẫn về kỹ thuật PCr không,hiện em đang rất cần vì em co nhiều chỗ không hiểu lắm, thí dụ như độ nhạy là gì vậy ạ,và vì sao chỉ cần có nhiều đoạn ADN thi lại xác định được bệnh vậy ạ.
Em thấy PCR có nhiều ứng dụng hay quá nhưng em hok hiểu nên muốn tìm hiểu thêm

 

[Trương Xuân Đại]

Nếu muốn bạn đọc cơ bản trước tìm 2 quyển "Sinh học phân tử "Hồ Huỳnh Thùy Dương
"Kĩ thuật di truyền"Phan Cự Nhân

 

[Trịnh Thành Trung]

Mình chỉ chạy những đoạn dưới 400 bp, dùng goldtaq thì giá chỉ dưới 100 usd.

Bác này là dân chính gốc chợ Ngã Tư Sở hay sao ý, nói thách khiếp quá.

Quatitative realtime PCR với SYBR green I hoặc Taqman, dùng với GoldTaq của AB, giá chỉ khoảng 1,5 USD/ 1 phản ứng 50ul (chưa tính bước tách DNA). Nếu chạy với phản ứng 25ul thì giá chỉ còn một nửa.

Không biết quê bác có con kiến nào bé như con voi không? :d

 

[Trịnh Thành Trung]

Cho mình hỏi mỗi phản ứng real-time PCR thường tốn hết bao tiền nhỉ?
Mỗi phản ứng long-range PCR tốn tầm bao nhiêu (enzyme xịn nhất ...v.v)? Với đoạn amplicon của mình tầm 13, 15 và 27 kbp.

Mục đích bác chạy real-time PCR để làm gì mà chạy với đoạn dài mấy kilomet vậy?

 

[viet23ht]

"Giá cả thời lạm phát'

Đấy là tớ chạy thể tích phản ứng là 10 ul đấy.
Thử hỏi ở Việt Nam bây giờ tìm xem có huynh đệ nào chạy rẻ như Thành nói không?

 

[Nguyễn Xuân Hưng]

Đấy là tớ chạy thể tích phản ứng là 10 ul đấy.
Thử hỏi ở Việt Nam bây giờ tìm xem có huynh đệ nào chạy rẻ như Thành nói không?

Tháng vừa rồi lab em (có 2 PhD, 1 PostDoc) tiêu hết 60K Euro nhưng cũng chạy Real-time PCR với phản ứng 10 µl. Tuy nhiên giá dưới 100 USD thì đúng rồi, dưới mà, có thể chỉ có 1 cent :d. Mà hình như bác viet23ht tính giá thành phản ứng theo kiểu từ A-Z (thu mẫu, tách RNA, tổng hợp cDNA.... cho tới phân tích kết quả) thì phải :d.

 

[Trịnh Thành Trung]

Tháng vừa rồi lab em (có 2 PhD, 1 PostDoc) tiêu hết 60K Euro nhưng cũng chạy Real-time PCR với phản ứng 10 µl. Tuy nhiên giá dưới 100 USD thì đúng rồi, dưới mà, có thể chỉ có 1 cent :d. Mà hình như bác viet23ht tính giá thành phản ứng theo kiểu từ A-Z (thu mẫu, tách RNA, tổng hợp cDNA.... cho tới phân tích kết quả) thì phải :d.

Mình cũng biết là dưới 100 usd cũng có thể hiểu được là chỉ có 1 cent. Nhưng mà cái đồng chí viet23 nói thật là khủng khiếp.

Trong các loại thí nghiệm về SHPT thì hóa chất dành cho PCR và real-time được xếp vào cái loại rẻ mạt rồi. Ngay thậm chí là sequence.

Đồng chí viet23 nói cái gì cũng bớt bớt đi một chút (bớt khoảng 80%) để anh em đỡ sợ.

Thôi, mình cầm 1.000 Euro ra ngoài mua cái bánh mỳ ăn sáng đây :d

 

[viet23ht]

Thực ra đấy là tổng giá thành, nhưng thực tế mình làm với mục đích của phòng thí nghiệm, hoá chất độc quyền ...
Khi nào về Việt Nam làm việc thì mọi người sẽ hiểu.

 

[Nguyễn Xuân Hưng]

Thực ra đấy là tổng giá thành, nhưng thực tế mình làm với mục đích của phòng thí nghiệm, hoá chất độc quyền ...
Khi nào về Việt Nam làm việc thì mọi người sẽ hiểu.

Ôi em cũng mới đi thôi. Trước cũng ở VN làm mãi nên có gì mà không hiểu bác. Nhưng em thích cách tính tiền của bác. Bác Lương nên học theo cách tính này nhé.

Cần phải tính giá thành cho việc lặp lại, nhỡ chẳng may ngủ gật làm hỏng phải làm lại, đưa kết quả cho khách hàng nhưng họ không ứng ý bắt mình làm lại, chẳng may ống Taq lại vứt chỏng chơ ngoài nhiệt độ phòng.... Cứ thế mà cộng vào thì mới làm ăn được.

 

[viet23ht]

Giá giải trình tự

He he, bọn tớ có đơn đặt hàng 550 usd một trình tự khoảng 400 nu mà nhiều khi không dám nhận, có lẽ chưa đủ trình để kiếm tiền....

 

[Nguyễn Xuân Hưng]

He he, bọn tớ có đơn đặt hàng 550 usd một trình tự khoảng 400 nu mà nhiều khi không dám nhận, có lẽ chưa đủ trình để kiếm tiền....

Hehe, bác thật là biết cách dọa người. Mọi người đừng sợ nhé, ý bác viet23ht là những trình tự cực khó kiểu như rất khó tách chiết DNA hoặc RNA từ mẫu, trình tự chứa polyC hoặc các đoạn lặp liên tiếp.... đó mà.

 

[Dương Văn Cường]

Chạy 1 phản ứng Realtime mà hỏi hết bao nhiêu $ thì em bó tay.

Bác viet23ht trả lời được là dưới 100$ em bó nốt 2 chân.

Vấn đề ở đây là các bác chạy assay nào? System của hãng nào? Chạy SYBR Green only thì có khi chỉ vài cent (@ NX Hưng). Chạy hydrolysis probe đắt hơn kha khá vì phải order probe. Hybridization probe có lẽ đắt gấp đôi.

Khổ, làm culi mãi nên khả năng tính toán giá tiền cho 1 thí nghiệm của anh em hơi bị thiểu năng nhỉ

 

[Dương Văn Cường]

He he, bọn tớ có đơn đặt hàng 550 usd một trình tự khoảng 400 nu mà nhiều khi không dám nhận, có lẽ chưa đủ trình để kiếm tiền....

Bác bắn cho em đê

 

[Trịnh Thành Trung]

He he, bọn tớ có đơn đặt hàng 550 usd một trình tự khoảng 400 nu mà nhiều khi không dám nhận, có lẽ chưa đủ trình để kiếm tiền....

Chú Viet 23 tuổi này non cả về chuyên môn cũng như là những hiểu biết xã hội. Lãnh đạo nhà chú mà nhận hàng loạt cái đơn đặt hàng 550 usd/ 1 trình tự 400nu thì có ngày đi tù cả lũ. (thanh tra kinh tế nó mà nhảy vào là chú thấy ngay). Cái tiền 'kếch xù' kia người ta thường gọi là tiền 'giải ngân' hay còn gọi là tiền 'chia trác'. Thi thoảng làm 1 cái thôi, làm nhiều là lộ tẩy ngay. Chú mới 23 tuổi, còn trẻ, nên nhìn vấn đề theo nhiều khía cạnh, góc độ của xã hội hiện tại. Chú đừng nhìn nhận sự việc 1 chiều dưới cặp mắt của mình rồi lên đây hù dọa anh em. Chú có hiểu ý tôi nói không nhỉ?

 

[Lê Đức Dũng]

Chú Viet 23 tuổi này non cả về chuyên môn cũng như là những hiểu biết xã hội. Lãnh đạo nhà chú mà nhận hàng loạt cái đơn đặt hàng 550 usd/ 1 trình tự 400nu thì có ngày đi tù cả lũ. (thanh tra kinh tế nó mà nhảy vào là chú thấy ngay). Cái tiền 'kếch xù' kia người ta thường gọi là tiền 'giải ngân' hay còn gọi là tiền 'chia trác'. Thi thoảng làm 1 cái thôi, làm nhiều là lộ tẩy ngay. Chú mới 23 tuổi, còn trẻ, nên nhìn vấn đề theo nhiều khía cạnh, góc độ của xã hội hiện tại. Chú đừng nhìn nhận sự việc 1 chiều dưới cặp mắt của mình rồi lên đây hù dọa anh em. Chú có hiểu ý tôi nói không nhỉ?

thấy trong hộ ơ ghi 32 t rùi chứ không phải 23 nưa đâu ...