Thẩm định môi trường nuối cấy vi sinh vật

[tranlien97]

Chào cả nhà,

Nhờ cả nhà tư vấn giúp em, các môi trường dinh dưỡng sau khi pha xong và đổ ra đĩa petri thông thường ủ bao lâu thì mình mới đem cấy vi sinh vật vậy cả nhà.

Sản phẩm bên em phân tích là nước vô trùng, môi trường dinh dưỡng là TSA

Cảm ơn cả nhà nhiều nhiều

 

[arthrospira]

bạn định nuôi cấy VSV hay gì

 

[tranlien97]

Bên mình chỉ cần xác định vi sinh vật hiếu khí của môi trường sản xuất bằng phương pháp đặt đĩa và phương pháp vết (xác định vi sinh trên bề mặt bàn,sàn, tường ) ; và vsv hiếu khí của tp (nước vô trùng) bằng pp màng lọc.
Mặt khác, em tham khảo một cty dược, đối với pp vết việc lấy mẫu bề mặt cho vào ống nghiệm có chứa sẵn nước muối sinh và sau đó pha loãng bằng nước cất thì có vấn đề gì không ạ? Đọc một số tài liệu ghi là ko được pha loãng bằng nước cất hay nmsl. Em đang phân vân để chọn dung dịch pha loãng nào phù hợp. Nhờ anh tư vấn giúp em.
Em cảm ơn nhiều

 

[sang nguyen1]

mình có một anh ban chuyên về sản xuất môi trường nuôi cấy vi sinh, nếu bạn cần thì bảo mình nhé

 

[Methanotroph]

Qua một đêm thì có thể cấy đươc. Vì mục đích của việc cấy ria, cấy trang là để tạo ra khuẩn lạc rời, nên bạn chỉ cần để mặt thạch khô là ok ( ít nhất 4h sau khi đổ)

 

[supezing]

bề mặt dùng đệm phết hoặc đĩa rodac

Bên mình chỉ cần xác định vi sinh vật hiếu khí của môi trường sản xuất bằng phương pháp đặt đĩa và phương pháp vết (xác định vi sinh trên bề mặt bàn,sàn, tường ) ; và vsv hiếu khí của tp (nước vô trùng) bằng pp màng lọc.
Mặt khác, em tham khảo một cty dược, đối với pp vết việc lấy mẫu bề mặt cho vào ống nghiệm có chứa sẵn nước muối sinh và sau đó pha loãng bằng nước cất thì có vấn đề gì không ạ? Đọc một số tài liệu ghi là ko được pha loãng bằng nước cất hay nmsl. Em đang phân vân để chọn dung dịch pha loãng nào phù hợp. Nhờ anh tư vấn giúp em.
Em cảm ơn nhiều

bề mặt dùng đệm phết hoặc đĩa rodac

 

[kimnganta1]

Về phương pháp thì bạn theo TCVN 9716-2013 nhé. Phương pháp "phết" nhỉ (phết bề mặt hay surface), mình không thấy ai gọi là pp "vết". Về kiểm tra chất lượng môi trường nuôi cấy nói chung, kể cả môi trường nuôi cấy cho mẫu nước thì bạn theo TCVN 8128-2015 nhé.

Mình có thể sơ lược riêng cho môi trường TSA của bạn như sau:
- Cảm quan môi trường khô: tiêu chuẩn theo CoA
- pH: tiêu chuẩn theo CoA
- Vô trùng: vài đĩa ủ ở 30 - 35 độ C/ 5 ngày(kiểm tra vô trùng với vi khuẩn), vài đĩa ủ ở 20 - 25 độ C/ 7 ngày (kiểm tra vô trùng với vi nấm)
- Hiệu suất (khả năng dinh dưỡng): Sử dụng chủng vi sinh vật S.aureus ATCC 6538 để kiểm tra, thêm 100cfu chủng vào môi trường cần kiểm tra và môi trường đối chứng (môi trường này đã đạt chất lượng)
ủ ở 30 - 35độ C/ 72h. đếm số khuẩn lạc mọc trên cả 2 môi trường (môi trường cần kiểm tra và môi trường đối chứng) hiệu suất Pr = Số khuẩn lạc trên môi trường cần kiểm tra/ số KL trên mt đối chứng.
tiêu chuẩn Pr không nhỏ hơn 0.7
+ nếu mẫu nước bạn làm PP màng lọc thì bố trí thí nghiệm để kiểm tra hiệu suất cũng làm pp làng lọc nhé.
- Môi trường TSA không cần kiêm tra tính chọn lọc và đặc hiệu.


Chú ý: nếu mục đích kiểm tra chất lượng của bạn chỉ để khẳng định môi trường có vô trùng không và để đánh giá nội bộ (không cần đạt theo ISO hay GLP) thì bạn chỉ cần đổ đĩa trước 1 ngày, ủ đĩa thạch ở 30 - 35 độ C trong 18 - 24h là được, trong quá trình làm mẫu nước nhớ làm thêm đối chứng màng lọc

 

[cfareast]

Qua một đêm thì có thể cấy đươc. Vì mục đích của việc cấy ria, cấy trang là để tạo ra khuẩn lạc rời, nên bạn chỉ cần để mặt thạch khô là ok ( ít nhất 4h sau khi đổ)

Mình đọc bài post từ mấy năm, và comment. Mình thấy các bạn cứ trả lời loằng ngoằng, ko hiểu câu hỏi, hoặc hiểu câu hỏi, lại trả lời linh tinh. Người ta hỏi từ lúc đổ thạch bao lâu thì cấy được, bạn thì 4 tiếng, bạn thì qua đêm, bạn thì đưa công thức này nọ lung tung. Tuy muộn, nhưng ngứa mắt nên trả lời thay chắc chủ thớt không cần câu trả lời nữa.

Từ lúc đổ môi trường agar, khoảng 30 phút là cấy được (tùy nhiệt độ phòng, tùy nồng độ agar, độ axit môi trường), tốt nhất lấy que hay đầu côn chọc thử cứng cứng là được).

Đừng để qua đêm nếu bạn chan, gạt đếm tế bào. Vì nếu chẳng may đĩa nhiễm 1 con vK, thì hôm sau gạt sẽ hiện cả đĩa.
Đừng để 4h , vì Éo ai ngồi đợi đến 4h sau.
Còn câu 2: bạn pha loãng bằng nước muối sinh lý, hoặc đệm gì cũng dc, kể cả dùng dung dịch môi trường. Quan trọng gì đâu, miễn nó loãng là được. Nước deion, thì sợ tế bào vỡ nên ko dùng.

các bạn làm khoa học, nên hiểu đúng câu hỏi và trả lời đúng. Ghét nhất mấy đứa hỏi 1 đằng, trả lời 1 nẻo. Xui trẻ con ăn cứt gà!

Nhiều đứa xui để qua đêm mới cấy. Xin lỗi chứ nếu thao tác đổ môi trường nhiễm, hoặc box ko sạch, nếu chẳng may nhiễm 1-2 con vi khuẩn, làm luôn thì không sao. Nếu để qua đêm thì hôm sau là toang ngay vì có thể khuẩn lạc quá nhỏ, ko nhìn được, nhưng chan/plating ra thì cả triệu tỉ con luôn.