Chia sẻ kinh nghiệm nuôi tế bào Vero

[Nguyễn Phạm Minh Hoàng]

Hiện mình đang nuôi cấy tế bào Vero nhưng còn thiếu kinh nghiệm nhiều. Bạn nào có thể giúp mình có những tài liệu về nuôi cấy loại tế bào này được không? Nhất là phần đặc điểm của nó.

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Bạn thiếu kinh nghiệm gì?
Nuôi tế bào quan trọng nhất là đừng để cho nó nhiễm.
Tế bào Vero thì quá quen thuộc rồi. Bạn vào ATCC đánh Vero nó lên một loạt dòng cho bạn. Bạn kiểm tra xem Vero của mình thuộc dòng nào. Có lẽ các dòng Vero cũng không khác nhau nhiều lắm.
Nếu không bạn cũng có thể tự dựng đường cong tăng trưởng của nó rồi dựa vào đó mà nuôi thôi.
Quan trọng nhất vẫn là: good aseptic techniques = kỹ thuật vô trùng tốt.
Tài liệu nuôi cấy tế bào nói chung thì bạn có thể xin lab C cuốn e-book: Animal cell culture a manual of basic techniques 5th edition của I. Freshney.

 

[Nguyễn Phạm Minh Hoàng]

Tế bào Vero

Uhm, cám ơn những kinh nghiêm chia sẻ của bạn.
Theo bạn nói thì mình có thể dựng đường cong trước rồi trang web Atcc có thể thiết kế qui trình nuôi cho mình a? Mình nuôi trong plate 6 giếng thường hay bị hiện tượng tế bào không phát triển tốt, lúc tróc bằng trypsin nó giống như là một sợi chỉ, kéo thành một sợi dài tế bào. không hiểu vì sao?????

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Ý tôi muốn nói: nếu bạn đã có đủ thông tin đầy đủ về dòng tế bào của bạn thì cứ theo đó mà nuôi (môi trường gì, CO2 hay không CO2, mấy ngày thay môi trường, mấy ngày cấy chuyền, mật độ cấy...v.v). Nếu bạn nuôi môi trường khác người ta thì tự dựng lại đường cong rồi dựa vào đó mà nuôi.
Hiện tượng của bạn cũng thường gặp thôi. Bạn lấy pipetteman bơm vài lần cho tế bào nó tách nhau ra, quan sát lại dưới kính hiển vi xem còn cụm tế bào nào không. Nếu còn thì tiếp tục bơm.
Thông thường dạng này thường gặp khi tế bào của bạn bị để quá confluent, mọc chồng lên nhau luôn. Nếu vậy cấy truyền trước khi tế bào mọc kín sẽ đỡ bị cụm tế bào hơn. Ngoài ra khi cho trypsin vào tránh đụng chạm mạnh vào bình nuôi. Để yên khoảng 15-20 giây, đổ trypsin ra rồi đem ủ 37 độ trong 10-15 phút.
Nếu vẫn có hiện tượng đó xem lại trypsin. Sách nói khi chế trypsin phải đánh tới 1 tiếng đồng hồ mới tan hết đấy. Nếu không ngại EDTA gây độc tế bào của bạn thì tăng hàm lượng EDTA lên cũng giảm cụm tế bào nhiều hơn. Trypsin nên xài trong khoảng 2-3 tuần thôi. Nếu không xài hết đem chia nhỏ, cất ở -20 độ để kéo dài thời gian sử dụng.
Trang web ATCC chứa thông tin về các dòng tế bào phổ biến, ví dụ một dòng Vero của bạn nè:
http://www.atcc.org/common/catalog/numSearch/numResults.cfm?atccNum=CRL-1586

 

[Nguyễn Phạm Minh Hoàng]

Theo bạn, sự thay đổi màu sắc trong quá trình nuôi tế bào là do những nguyên nhân nào? Theo tôi biết có thể là do sự thay đổi pH hoặc nhiễm khuẩn. Vậy có cách nào xác định chính xác tác nhân làm màu sắc môi trường của mình thay đổi đượckhông? trường hợp nhiễm mycoplasma thì giải quyết như thế nào?

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Thay màu môi trường nuôi thì chắc chắn là pH thay đổi rồi. Còn vì lý do gì thì bạn tự quyết định lấy. Thay đổi đột ngột = nhiễm khuẩn nặng (nếu kèm theo đục môi trường nữa). Mycoplasma thì không làm thay đổi pH nhanh như vậy. Muốn kiểm tra nhiễm mycoplasma bạn làm một test mycoplasma thôi. Nhiễm mycoplasma rồi thì "yục" đi chứ còn làm gì nữa. Tất nhiên nếu là "của hiếm" thì cũng xử lý kháng sinh xem sao.
Thực tế tôi chưa làm test mycoplasma lần nào, vì với đk phòng thí nghiệm không nhiễm mycoplasma mới là chuyện lạ. Chẳng lẽ làm ra kết quả positive rồi thì không lấy nữa à? Thực tế theo thống kê hơn 50% lab ở Mỹ cũng không kiểm tra mycoplasma contamination thường xuyên (1 năm 2 lần). Khi nào có lab tốt hẵng lo mycoplasma.
Những điều bạn hỏi toàn là cơ bản cả. Bạn nên kiếm sách mà đọc. Khi nào thực sự khó khăn trong thực nghiệm thì mới nên đi hỏi. Cuốn I. Freshney Culture of Animal cells trả lời tất cả những câu hỏi bạn đặt ra đấy.

 

[Nguyễn Phạm Minh Hoàng]

Trong cuốn Current protocols of cell culture có phần test mycoplasma, ko cần dùng bộ kit dắt tiền đâu. Chỉ cần có môi trường xài cho myco thui
Bạn tham khảo thử coi sao.

 

[Nguyễn Phạm Minh Hoàng]

Ủ trípin cho tế bào Vero theo thời gian bạn nói thì tế bào nó chít hết mất.
Mình hcỉ ủ 5 phút là tối đa. Cũng tùy nữa xem nó dày mỏng thế nào nữa
Cuốn của Fresley mình cũng đọc rùi

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Tôi nhắc lại những điều bạn hỏi rất cơ bản. Bạn tiếp tục hỏi như vậy chẳng ai trả lời bạn nữa đâu.
Nếu bạn đọc cuốn Freshney rồi có lẽ chẳng cần đi hỏi tôi nữa. Chúc vui.

 

[Nguyễn Phạm Minh Hoàng]

Có lẽ bạn Lương hơi thiếu kinh nghiệm trong việc chia sẻ kinh nghiệm rối. Có những vấn đề không thể chỉ dựa vào lý thuyết suông trên sách vở có thể giải thích đươc khi bạn thực sự gặp phải khi nuôi cấy. Tôi đã đọc rất nhiều về Vero, kể cả những serious problems trong nuôi cấy nhưng vẫn cảm ?thấy ?mình là thiếu kinh nghiệm để có thể học hỏi và chia sẻ kinh nghiệm từ người khác. Thanks for your experiences.
Những bạn nào có gặp những vấn đề về nuôi cấy có thể chia sẻ và học hỏi kinh nghiệm với nhau.
Mong nhận được nhiều sự đóng góp của các bạn.

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Lý thuyết là "lý thuyết suông" nếu bạn là con vẹt. Nhưng nếu bạn hiểu thực sự những gì người ta khuyên mình trong sách thì nó không suông đâu bạn ạ.
Dẫn chứng nhé:
Bạn có vẻ như tỏ ra biết hơn tôi về mycoplasma test, bạn đã thực sự làm chưa? Hay chỉ mới đọc protocol. Thử xem xét trường hợp nhé: lab bạn chắc chắn có vấn đề nhiễm khuẩn. Liệu bạn có dám nuôi thêm mycoplasma trong lab của mình hay không? (phương pháp kiểm tra nhiễm mycoplasma bằng cách nuôi trên agar). Nếu không nuôi mycoplasma trong lab của mình thì bạn nuôi trong phòng vi sinh liệu có đảm bảo rằng mycoplasma nhiễm là từ phòng vi sinh hay từ môi trường của mình?
Bạn có biết ủ trypsin lạnh tôi ủ tới 24 tiếng, ủ nóng thêm 30 phút để tách sơ cấp không? Sao bạn nói trổng trổng là ủ 5 phút tế bào nó chết hết còn đâu?
Bạn đọc kỹ về Vero, vậy tôi đố bạn nhé: dòng Vero nào được WHO thông qua để cho sản xuất vaccine, và tiêu chí nào là tiêu chí quyết định?

 

[Nguyễn Phạm Minh Hoàng]

Mình nghĩ những người vào forum này là để học hỏi và trao đổi kinh nghiệm trên tiêu chí thân thiện và cởi mở. Có thể nhiều người chưa hiểu về một vấn đề nào đó, nếu bạn có thiện chí và muốn trao đổi và có kinh nghiệm thì trả lời những câu hỏi bạn mình đặt ra chứ không nên trả lời theo kiểu khiêu khích người khác. Chắc bạn hiểu!
?Về vấn đề mycoplasma, mình đọc thấy trong cuốn Current thấy hay nên nói bạn đọc tham khảo. Sao bạn lại có thái độ như vậy???Bạn phản ứng tiêu cực với thiện chí của người khác nhưng lại không xem thái độ của mình.
?Đây là lần cuối mình trả lời những câu hỏi "hơi" khiếm nhã của bạn!! ?
?Bạn hỏi đúng người rồi đấy. Tế bào Vero là dòng tế bào mình đang nuôi cấy cho sản xuất vaccin. Nhưng với thái độ của bạn mình nghĩ ko cần phải tốn thêm lời nữa. chào bạn.Chúc vui!

 

[Hoàng Đức Minh]

Tế bào Vero là dòng tế bào mình đang nuôi cấy cho sản xuất vaccin. Nhưng với thái độ của bạn mình nghĩ ko cần phải tốn thêm lời nữa. chào bạn.Chúc vui!

Chà nghe hay quá! Đề tài của bạn có bao nhiêu kinh phí mà đòi nuôi tế bào sx vắc xin và cụ thể là vắc xin gì ?

 

[Huỳnh Như Ngọc Hiển]

Nuôi cấy tế bào Vero cho sản xuất vaccin. Chưa hình dung rõ như thế nào.
1/ Nuôi cấy để sản xuất vaccin, vậy cái chính là để sản xuất vaccin. Do đó không cần chia xẻ KN nuôi cấy, lời bác Lương nói chẳng có gì khiếm nhã.
2/Suy người mà nghĩ đến ta. Không hiểu thiếu KN trong việc chia xẻ KN nuôi cấy là thế nào ? Suy nghĩ kiểu chủ quan không dựa trên thực tiễn khách quan. Tôi hỏi N.P.M.Hoàng có từng tham gia Nature network chưa ? Nơi ấy toàn chuyên gia KH sừng sỏ đứng đầu thế giới đấy, có thấy cách người ta chia xẻ KN chưa ?
3/ ...Không cần phải tốn thêm lời...thể hiện sự đuối lý và hậm hực trong tranh luận. gặp quá nhiều ở edu.net , ai phải ai quấy chẳng đã phơi bày ở lời nói rồi. Cái cách tranh luận như thế chỉ thấy ở thời đại @. Câu hỏi đầu tiên người ta đã trả lời lại hỏi câu tiếp theo: theo bạn....Cách hỏi này chỉ bắt gặp ở HS VN, rõ mới nhận ra tại sao phương đông đi trước về sau.
4/Đây là diễn đàn tự do ngôn luận, đặt câu hỏi không có nghĩa bài người khác "gõ máy" là trả lời câu hỏi đó. Không biết N.P.M.Hoàng có hiểu  cụm từ tiếng Việt "thảo luận" và "diễn đàn" là gì không. Hay lại chê sách TV viết chẳng ra gì, đi đọc Eng cho nó khoa học, cho nó chính xác.
5/ Tiêu chí diễn đàn là thuần túy chuyên môn, chính N.P.M.Hoàng chứ không phải ai khác cố tình làm loãng chủ đề. Bởi đó bác Lương mới nói hỏi thêm là không ai trả lời. Không rõ N.P.M.Hoàng có biết legal ethic khi gửi câu hỏi tới liên mạng các nhà KH quốc tế hay không ? Không thì vô đây coi cho biết www.madsci.org

Edited bởi Nguyễn Ngọc Lương
Đề nghị bạn Hiển tránh dùng từ nặng lời và công kích cá nhân.

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Tôi xin lỗi bạn Hoàng, tôi nhầm bạn học ở ĐHKH Tự nhiên Tp Hồ Chí Mình nên mới bảo bạn lên lab C để lấy sách. Nếu bạn cần cuốn I.Freshney 5th edition (bản mới nhất) tôi có thể gửi. Nếu bạn vào một forum cell culture chẳng hạn, cuốn I. Freshney là "gối đầu giường" đấy.
Tôi không có ý gì, chỉ nhắc nhở bạn là nếu bạn "thực sự muốn hỏi" thì sẽ có người "thực sự trả lời". Còn nếu chỉ viết dăm câu xả stress thì cũng không nên đòi hỏi sẽ được cái gì.

 

[Trương Xuân Đại]

Vero cell
From Wikipedia, the free encyclopedia
Jump to: navigation, search
Vero cells are lineages of cells used in cell cultures.[1]
The Vero lineage was isolated from kidney epithelial cells extracted from African green monkey (Cercopithecus aethiops). The lineage was developed on 27 Mar 1962, by Yasumura and Kawakita at the Chiba University in Chiba, Japan. [2]
Vero cells are used for many purposes, including:
• screening for the toxin of E. coli, first named Vero toxin after this cell line, and later called Shiga-like toxin due to its similarity to Shiga toxin isolated from Shigella dysenteriae.
• as host cells for growing virus; for example, to measure replication in the presence or absence of a research pharmaceutical, or testing for the presence of rabies virus.
• as host cells for eukaryotic parasites, specially of the Trypanosomatids.
The Vero cell lineage is continuous and aneuploid. A continuous cell lineage can be replicated through many cycles of division and not become senescent.[3] Aneuploidy is the characteristic of having an abnormal number of chromosomes.

Thế bạn Hoàng đã tìm được đặc điểm của Tế bào Vero chưa?

 

[Nguyễn Phạm Minh Hoàng]

Virus cúm sau khi cho xâm nhiễm vào tế bào Vero, đem cấy chuyển 1 lần nữa thì lại không có kết quả(tế bào chết rất ít, thử nghiệm test HA âm tính) nhưng khi tiến hành với MDCK thì lại cho kết quả :?: có thể giải thích là do MDCK là tế bào này thích hợp cho sự xâm nhiễm của virus cúm.
? Các bạn có biế cách nào để có thể cấy chuyền víu trên tế bào Vero ko??? Giúp mình với nhé!!!

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Hình như chỗ nào cũng bị trường hợp này. Nghe nói một số nơi cũng đã thử thêm trypsin với các nồng độ khác nhau cũng không thành công. Bạn đọc thêm bài này để biết rõ hơn:
Kaverin, N. V., and R. G. Webster. 1995. Impairment of multicycle influenza virus growth in Vero (WHO) cells by loss of trypsin activity. J. Virol. 69: 2700–2703.
Có thể vấn đề nằm ở chủng virus bạn đang sử dụng.
PS: chưa tự tay làm nên không thể giúp thêm bạn được điều gì.

 

[Phạm Đình Chương]

Anh Lương đã cư xử rất mẫu mực. SHVN nổi tiếng nói thẳng, đôi lúc làm mích lòng nên bạn Hoàng cũng đừng giận. Anh Hiển có ý của anh nhưng lời nói cũng hơi nặng, mong anh dằn lại.
Về câu bạn hỏi, tôi cũng ko có kinh nghiệm về Vero nên ko dám nói bừa. Nhưng các câu trả lời tôi nghĩ gần như thỏa mãn câu hỏi của bạn.
Về test Mycoplasma, tôi cũng đã thực hiện nhiều lần. Chủ yếu tôi dùng kit của Bionic ở Hàn. Kết quả tốt. Tôi cũng dùng primer tự thiết kế nhưng thất bại. Còn khi phát hiện Mycoplasma, có thể dùng Plasmocine (Invivogen) để diệt, hiệu quả 100%. Chúc các bạn vui.

 

[Nguyễn Đức Dũng]

Mình đang tìm hiểu về Tế bào Vero, nếu muốn mua để về mày mò thì mình phải làm ji?? Liên lạc với ai??
Giúp mình nhé, thanks