Xác định hoạt độ anpha amylase, beta- amylase, gama- amylase.

[daovanminh]

Hiện mình đang thu nhận và tinh sạch Anpha- amylase trong hệ amylase. Nhưng mình chưa rõ phương pháp xác định hoạt độ enzyme anpha amylase, beta amylase, và gama. sau đó dùng phương pháp gì để tinh sạch. Ai biết thì bảo mình với nhé.

 

[cfareast]

Hiện mình đang thu nhận và tinh sạch Anpha- amylase trong hệ amylase. Nhưng mình chưa rõ phương pháp xác định hoạt độ enzyme anpha amylase, beta amylase, và gama. sau đó dùng phương pháp gì để tinh sạch. Ai biết thì bảo mình với nhé.

Những cái này thuộc basic rồi! Người chủ đề tài phải biết hoặc đọc hiểu được để hướng dẫn người làm.

Nếu bạn hỏi vậy, thì chứng tỏ bạn rất ít đọc, và mới bắt đầu từ con số 0. Về hoạt tính, hoạt độ, tinh sạch protein, chạy điện di .... Nếu bạn tự tìm hiểu, thì sẽ không ra hoặc rất phức tạp...

Bạn cần phải biết:
- Thế nào là alpha beta gama amylase, làm sao phân biệt được?
- Cơ chất gì thích hợp cho mỗi loại enzyme.

Giữa alpha và Beta, bạn dùng soluble starch làm cơ chất, đo hoạt tính bằng phương pháp DNS. gama thì dùng pNPG (glucose link với phenol).

Rất hiếm alpha và beta amylase thủy phân pNpG, nên có thể phân biệt được với Gama do nó thủy phân được (exo manner).

Nhưng nếu đo hoạt tính , bạn sẽ không phân biệt được đâu là alpha và beta. Cái này bạn phải chạy TLC hoặc HPLC.

Một điều cần biết, rất nhiều enzyme khác như pullulanase, cũng có khả năng thủy phân tinh bột. Nên bạn phải dùng cơ chất đặc hiệu để biết enzyme của bạn là gì, có phải chinh xác là amylase không và thuộc loại gì (alpha, beta)

Vấn đề tinh sạch protein, thì là kiến thức chung rồi.
Tùy theo mục đích đề tài của bạn là làm đơn giản, hay nghiên cứu sâu hơn để có chiến lược ngay từ đầu.

Nói tóm lại, để nghiên cứu sâu alpha, beta và gama amylase, bạn phải cần kiến thức cơ bản, và phải đặt một số hóa chất đặc thù.

NOTE: Bạn cũng không thể kết luận được Beta amylase nếu chỉ đo hoạt tính, nghiên cứu tính chất... vì có loại alpha amylase là malto-forming amylase, thuộc alpha amylase, nhưng thủy phân ra đường maltose only. Chỉ có phân tích trình tự gen, hoặc xác định cấu hình alpha hay beta của sản phẩm này mới kết luận được là beta-amylase

 

[daovanminh]

Cảm ơn bạn nhé.

Hiện mình cũng đã tối ưu được điều kiện sinh tổng hợp Amylase, thu và tạo được chế phẩm kỹ thuật. Mình xác định hoạt tính bằng phương pháp DNS với cơ chất là tinh bột. Hiện mình cũng đang điện di và làm Zymogram để xem kích thước Protein. Muốn xác định trong chế phẩm của mình có bao nhiêu % Anpha-amylase, beta- amylase nhưng chưa rõ phương pháp xác định hoạt tính hai loại enzyme đó, định cho thủy phân rồi chạy sác ký giấy. Nhưng vẫn thấy không ổn. Bạn nào đã làm và có tài liệu thì cho mình xin nhé.

 

[cfareast]

Hiện mình cũng đã tối ưu được điều kiện sinh tổng hợp Amylase, thu và tạo được chế phẩm kỹ thuật. Mình xác định hoạt tính bằng phương pháp DNS với cơ chất là tinh bột. Hiện mình cũng đang điện di và làm Zymogram để xem kích thước Protein. Muốn xác định trong chế phẩm của mình có bao nhiêu % Anpha-amylase, beta- amylase nhưng chưa rõ phương pháp xác định hoạt tính hai loại enzyme đó, định cho thủy phân rồi chạy sác ký giấy. Nhưng vẫn thấy không ổn. Bạn nào đã làm và có tài liệu thì cho mình xin nhé.

Bác phải tinh sạch được Enzyme thì mới nghiên cứu sắc ký giấy được. Thông thường beta amylase chỉ có ở thực vật.

Còn dịch enzyme của bác chỉ có thể gọi là enzym thủy phân tinh bột, chứ ko thể nói được chính xác là beta, alpha-amylase, hay không? nên gọi chung là amylase hay amylolytic enzyme.

còn muốn biết có phải beta hay không, bác nên xác định cấu hình maltose tạo thành (phương pháp vật lý), xem là alpha hay beta.

Chạy sắc ký giấy (TLC), ủ enzyme theo thời gian, rồi chạy. Bạn có thể xác định được kiểu cắt endo hay exo... và tạo sản phẩm gì. Ở đây là làm cả hỗn hợp enzyme, vì chưa tinh sạch được.

Ko tinh sạch được, thì ko thể nói cụ thể có enzyme gì trong hỗn hợp, vì có thể có nhiều enzyme cùng thủy phân tinh bột, nhưng ko phải alpha, beta.