Xin lỗi có sự sai sót từ phía mình ở một số thí nghiệm chút. Bữa trước làm thì lugol bắt màu CMC thành xanh, nhưng bữa nay làm lại thì bắt màu vàng, vòng phân giải màu trắng trong đẹp.
Bữa trước làm thí nghiệm ktra tính nhuộm enzyme của lugol. Mẫu 1: CMC
Mẫu 2: CMC + EN
Mẫu 3: En
[/IMG]
CMC nhuộm lugol trong 1ph rồi đổ ra
Lúc đầu nhuộm
[/QUOTE]
Lugol dùng cho tinh bột.
congo red cho CMC.
Cái này thành chuẩn rồi, bạn đừng có chế biến hay modify nữa. Khó chấp thuận và làm lệch hướng nghiên cứu của bạn.
Nhuộm lugol cho CMC có vòng, không nói rằng mẫu có hoạt tính cellulase. Đơn giản là CMC của bạn có dính tinh bột (vì đơn giản CMC ko thể tinh khiết 100%), và hoạt tính mẫu là amylase. Hoặc ví lý do hóa học nào đó, dịch mẫu của bạn khuếch tán làm lugol ko bám vào CMC, hoặc làm hỏng lugo chỗ khuếch tán, tạo phức với lugol... Nói tóm vì một lý do hóa lý nào đó, ko phải bản chất enzyme.
Cái vòng phân giải cũng ko nói lên hoạt tính cao hay thấp, chỉ là có hay ko thôi! để screening tương đối.
Còn giảm 20% cellulose, có thể tính theo đường khử, quy ra glucose...nhưng tính theo cách này sẽ làm bạn thiệt, vì độ giảm thấp. Ví dụ tạo được các oligo 10-100 gốc glucose, với trọng lượng 10-100x180 Da, nhưng tính theo đường khử chỉ là 1 gốc glucose. Kể cả enzyme thủy phân hết cellulose thành các gốc 2 glucose, 3 glucose, 4 glucose...thì hiệu suất theo đường khử cũng chỉ là 50 , 33 và 25% tương ứng.
Cách 2: đo lượng cellulose trước và sau phản ứng. Tất cả những oligosaccharides tạo thành sẽ tan trong nước, còn lại là cellulose thô, ly tâm thu hồi là xong. Cách này sẽ làm tăng % thủy phân, vì tính theo trọng lượng, chứ ko tính theo gốc đường khử.
Để chọn mục đích thủy phân cellulose, bạn nên chọn endo-enzyme. Hãy phát triển kỹ thuật TLC (sắc ký giấy). Kỹ thuật này đơn giản lắm, mà ko thể thiếu khi nghiên cứu enzyme thủy phân.
