Chào các anh chị trên diễn đàn. Em có làm một bài thí nghiệm về việc thu nhận enzyme amylase từ lúa nảy mầm với trình tự thí nghiệm như sau:
1. Đầu tiên em tiến hành ủ cho hạt nảy mầm với thời gian là 3 ngày và 5 ngày.
2. Sau đó tiến hành xay nhuyễn và lọc, ly tâm để thu nhận được dịch enzyme thô.
3. Tiếp theo em tiến hành tủa bằng amoni sunfate - (NH4)2SO4 - với nồng độ muối là 25% và bão hòa (tủa với muối 25% sau đó ly tâm, lấy tủa, rồi tiếp tục tủa với amoni sunfate bão hòa - em không dám gọi đây là tủa phân đoạn nhưng không biết thực hiện như thế này có được gọi là tủa phân đoạn không?).
4. Vậy qua các bước trên em có được 4 mẫu là: Mẫu 3 ngày + tủa bão hòa; Mẫu 3 ngày + tủa 25%; Mẫu 5 ngày + tủa bão hòa; Mẫu 5 ngày + tủa 25%.
5. Em tiến hành xác định hoạt tính chung và hoạt tính riêng của cả 4 mẫu và kết quả cho ra: Mẫu 2 có hoạt tính chung cao nhất; Mẫu 1 có hoạt tính riêng cao nhất.
6. Từ kết quả này em tiến hành lọc gel (dùng P10; tách được phân tử lượng 20.000 dalton - có thể em không chắc lắm).
7. Sau khi lọc gel em thu nhận được 3 bit lần lượt là: Bit 1 (mẫu I - Ống nghiệm thứ 7, 8, 9 của Mẫu 3 ngày 25%); Bit 2 (mẫu II - ống nghiệm 4, 5, 6 của Mẫu 3 ngày 25%); Bit 3 (mẫu III - ống nghiệm 5, 6, 7, 8 của Mẫu 3 ngày bão hòa).
8. Sau giai đoạn lọc gel em mang các mẫu này tiếp tục tiến hành xác định hoạt tính của các enzyme này (không chắc là enzyme nhưng vẫn mang đi thử hoạt tính bằng tinh bột).
9. Sau đó em dùng DNS để xác định hàm lượng đường khử, đo giá trị OD với đường chuẩn để suy ra lượng đường khử >>> sau đó là hoạt tính chung.
10. Kết quả cuối cùng là: Giá trị OD (Mẫu I là 0.425, Mẫu 2 là 0.704, Mẫu II là 0.393) và Giá trị của hoạt tính chung (Mẫu I là 0.2378, Mẫu 2 là 0.357, Mẫu II là 0.2241).
Vậy anh chị trong diễn đàn có thể giúp em giải đáp câu hỏi của em là:
>> Cả 3 mẫu mang đi thử hoạt tính đều có hoạt tính vậy 3 mẫu đó có thể là những loại enzyme nào? Làm sao mình có thể suy luận ra được?
Em rất mong được anh chị giúp đỡ hoặc cùng trao đổi về vấn đề này!
1. Đầu tiên em tiến hành ủ cho hạt nảy mầm với thời gian là 3 ngày và 5 ngày.
2. Sau đó tiến hành xay nhuyễn và lọc, ly tâm để thu nhận được dịch enzyme thô.
3. Tiếp theo em tiến hành tủa bằng amoni sunfate - (NH4)2SO4 - với nồng độ muối là 25% và bão hòa (tủa với muối 25% sau đó ly tâm, lấy tủa, rồi tiếp tục tủa với amoni sunfate bão hòa - em không dám gọi đây là tủa phân đoạn nhưng không biết thực hiện như thế này có được gọi là tủa phân đoạn không?).
4. Vậy qua các bước trên em có được 4 mẫu là: Mẫu 3 ngày + tủa bão hòa; Mẫu 3 ngày + tủa 25%; Mẫu 5 ngày + tủa bão hòa; Mẫu 5 ngày + tủa 25%.
5. Em tiến hành xác định hoạt tính chung và hoạt tính riêng của cả 4 mẫu và kết quả cho ra: Mẫu 2 có hoạt tính chung cao nhất; Mẫu 1 có hoạt tính riêng cao nhất.
6. Từ kết quả này em tiến hành lọc gel (dùng P10; tách được phân tử lượng 20.000 dalton - có thể em không chắc lắm).
7. Sau khi lọc gel em thu nhận được 3 bit lần lượt là: Bit 1 (mẫu I - Ống nghiệm thứ 7, 8, 9 của Mẫu 3 ngày 25%); Bit 2 (mẫu II - ống nghiệm 4, 5, 6 của Mẫu 3 ngày 25%); Bit 3 (mẫu III - ống nghiệm 5, 6, 7, 8 của Mẫu 3 ngày bão hòa).
8. Sau giai đoạn lọc gel em mang các mẫu này tiếp tục tiến hành xác định hoạt tính của các enzyme này (không chắc là enzyme nhưng vẫn mang đi thử hoạt tính bằng tinh bột).
9. Sau đó em dùng DNS để xác định hàm lượng đường khử, đo giá trị OD với đường chuẩn để suy ra lượng đường khử >>> sau đó là hoạt tính chung.
10. Kết quả cuối cùng là: Giá trị OD (Mẫu I là 0.425, Mẫu 2 là 0.704, Mẫu II là 0.393) và Giá trị của hoạt tính chung (Mẫu I là 0.2378, Mẫu 2 là 0.357, Mẫu II là 0.2241).
Vậy anh chị trong diễn đàn có thể giúp em giải đáp câu hỏi của em là:
>> Cả 3 mẫu mang đi thử hoạt tính đều có hoạt tính vậy 3 mẫu đó có thể là những loại enzyme nào? Làm sao mình có thể suy luận ra được?
Em rất mong được anh chị giúp đỡ hoặc cùng trao đổi về vấn đề này!
