Protease

[mkcuong]

Chào mọi người!
Mình có một vấn đề cần thảo luận với mọi người, đó là về các protease. Vừa rồi mình có học về cách xác định hoạt độ protease thì thầy hướng dẫn làm theo phương pháp Anson cải tiến. Nhưng mình thắc mắc là protease là một nhóm gồm 1 lũ enzym nhưng mà sao xác định hoạt độ chung phương pháp như vậy ?
Thêm nữa, khi học mình lại không thấy ai nói về cách định tính và định lượng protease cả. Hỏi thăm bác Google cũng bó tay. Bây giờ ví dụ có người đưa mình gồm 1 hỗn hợp 3 mẫu enzym: papain, pepsin, trypsin. Giờ họ yêu cầu chứng minh cho họ thấy trong mẫu đó có papain và hàm lượng của nó là bao nhiêu ? Vậy thì có phương pháp nào chuẩn sử dụng trong trường hợp này không ?
Mong các bạn giúp đỡ, cám ơn!

 

[Trịnh Thị Hồng Nhung]

-Protease loại nào thì cũng xúc tác cho quá trình phân cắt chuỗi peptide thành các acid amin, do đó đo lượng acid amin (thường là tyrozin do có phản ứng màu đặc trưng với thuốc thử folin) được tạo thành trong một thời gian nhất địn h thì suy ra được hoạt độ của protease đó. Trong phương pháp Anson cải tiến thường dùng cơ chất là cazein hoặc hemoglobin để đo hoạt độ enzyme.
"Đơn vị hoạt độ protease là lượng enzyme trong một thời gian 1 phút ở 30 độ C chuyển hóa được một lượng cazeinnat natri tương đương với một micromol tyrozin thành dạng không bị kết tủa bởi acid tricloaxetic. Một mol tyrozin bằng 0.181mg."
-Để định tính papain trong hỗn hợp bạn có thể điện di trên gel polyacrylamit-SDS, hoặc dựa vào phản ứng với cơ chất đặc trưng.
-Để định lượng, trước hết phân tách protein này ra khỏi hỗn hợp bằng các phương pháp sắc ký gel, trao đổi ion, HPLC... sau đó định lượng bằng phương pháp Ken-đan (Kjeldahl ), hay chính xác hơn bằng phương pháp Louri (Lowry)
(Không hiểu sao người ta lại có được một mẫu chứa protease của người và đu đủ, có lẽ bạn muốn xác định tác dụng tiêu hóa của đu đủ
Bạn có thể tham khảo giáo trình TN hóa sinh công nghiệp - Đặng Thị Thu, Nguyễn Thị Xuân Sâm, Tô Kim Anh- ĐH Bách Khoa HN