Xin hỏi về hấp áp lực agar + căn bản nuôi cấy vi sinh

[richi]

Chào các bạn,
Mình là lính mới. Bữa mình chuẩn bị môi trường thạch NA. Mà khi đun sôi thì thạch sẽ sủi lên và trào ra ngoài. Thấy thế nên mình không dám bỏ vào nồi hấp áp lực, vì nghĩ nó sẽ diễn ra tương tự. Nhưng mình lại đọc nhiều hướng dẫn chuẩn bị môi trường mà theo đó thì hấp cả môi trường đã pha agar. Như vậy là thế nào nhỉ? Làm sao để khi hấp agar không bị trào lên như vậy?

Mình muốn đổ thạch vào petri rồi sau đó mới hấp, để đảm bảo tiệt trùng, nhưng lại vướng mắc ở chỗ này.

Ngoài ra mình cũng hay nghe bảo phải sấy khô đĩa sau khi hấp, mình không có tủ sấy, vậy mình nên sấy khô bằng cách nào?

Mình cũng nghe nói về việc lật úp mặt thạch, vậy không hiểu khi nào thì lật, khi nào thì không? (vì sao phải lật đó mà ^^).

Mong các bạn đi trước chỉ bảo!
Cám ơn các bạn rất nhiều

 

[thecoolwind36]

chào bạn,mình có vài kinh nghiệm mún chia sẻ với bạn khi hấp 1 môi trường có bổ sung agar(CBA,NA,TSA,BHI agar...)
Thứ 1 là chai lọ: ví dụ bạn mún đổ 20 đĩa petri môi trường CBA thì bạn phải cần 400 ml môi trường(20ml cho mỗi đĩa petri).Và để đong 400ml thì bạn ko thể dùng chai Duran 500ml được,vì môi trường quá nhìu trong chai sẽ có thể khiến chai trào môi trường và khi thao tác đổ sẽ khó khăn.Nếu mún đổ 400ml thì bạn phải dùng chai 1 lít để đựng môi trường
Thứ 2 là khi hấp bạn phải để chai hở,không đậy chai quá chặt.Và nên cần có giấy bạc chụp bên ngoài chai(che khuất đi phần liên kết giữa nắp chai và cổ chai,hạn chế ngoại nhiễm)
Thứ 3: sau khi hấp thì bạn nên canh chai vừa nguội đến khoảng 50 độ thì tiến hành đổ đĩa petri ngay,nếu chưa thể đổ ngay nên để trong máy cách thủy duy trì nhiệt độ nóng,ko để agar bị đông đặc.Trước khi đổ đĩa phải vệ sinh lau chùi sạch sẽ khu vực cleanbench(nếu được nên bật UV khoảng 15 đến 30 phút trước khi đổ)
Nếu làm đúng được những điều như trên bạn sẽ có thể đổ đĩa ok.Ko có trường hợp bị trào môi trường đâu.Nếu bạn vẫn ko chắc chắn có thể liên hệ với mình,mình sẽ hướng dẫn kỹ hơn cho bạn. Yahoo: thecoolwind36.SDD: 0933698032. Good luck

 

[richi]

Cuối cùng cũng có người trả lời ^^ Cám ơn bạn rất nhiều!
Mình đổ đĩa loại nhỏ, mỗi đĩa chỉ xài khoảng 10ml thạch thôi (bề dày 2mm), như vậy ok chứ? Mình nghĩ như vậy cũng tiết kiệm hơn, hihi.
Mình có nghĩ lại về việc hấp môi trường có thạch, có lẽ khi hấp thì sẽ khác khi nấu, khi nấu sôi thạch trào lên cao tràn ra ngoài do chênh lệch áp suất, còn khi hấp trong nồi hấp thì áp suất trong ngoài bằng nhau nên có lẽ sẽ ko bị trào ra. Không biết mình nghĩ vậy có đúng không ^^.
Nhưng mình vẫn còn thắc mắc, là người ta hấp xong mới đổ đĩa. Nếu mình đổ đĩa trước rồi mới cho vào hấp thì sao?
Xin mọi người chỉ bảo!

 

[orion8x]

>.<! Mình tường ng ta toàn bo vào lò vi sóng giống như làm gel chạy điện di chứ, haha. Riết mỗi lần làm thí nghiệm là giống như vào bếp....

 

[richi]

Mình nghĩ người ta chỉ bỏ vào lò vi sóng là để hâm nóng lại thôi, chứ nó đã được tiệt trùng trước rồi. Trừ phi người ta không cần tiệt trùng nhỉ

 

[Vũ Thị Hoàn]

Khong ai lam nhu ban richi la so moi truong ra dia thach roi hap voi ly do:
Lam the nao de ban dam bao rang ban hoa tan toan bo cac thanh phan co trong MT dac biet la agar de phan bo deu ra tung dia thach?
Lam the nao de ban giu cho dia petri khong bi trao MT ra ngoai khi ban cho vao noi hap cung nhu lay ra?
Gia su nhu ba lay duoc dia petri ra ma khong bi trao thi the tich cua noi hap can to den muc nao de chua het duoc cho dia petri neu ban muon do khoang 2l MT?
Tai sao ban khong khu trung dia petri sau do do MT da khu trung vao dia da khu trung?

 

[thecoolwind36]

Thật ra chúng ta có thể đổ môi trường vào đĩa petri trước khi đem đi hấp vì cách làm đó có thể khử trùng cả môi trường lẫn petri(nhưng lưu ý 1 điều,bạn đọc kỹ hết bài viết này bạn sẽ tự hiểu được điều gì cần lưu ý nhưng mình có thể đảm bảo với bạn cách bạn nêu ra hoàn toàn sử dụng được.Còn theo bạn Hoàn không thể phân bố đều các thành phần ra từng đĩa là chưa đúng vì nếu mún chúng ta có thể đem đun sôi môi trường cho tan agar trước khi đem đi hấp.Ví dụ như vì 1 mục đích nào đó bạn buộc phải đổ 40ml môi trường agar vào 50 chai Duran 50ml.Bạn không thể cân môi trường và đong mỗi chai Duran được vì rất là tốn công và chưa chắc đều giữa các chai Duran.Nếu theo ví dụ bên trên bạn sẽ cần 2 lít môi trường cho 50 chai Duran nhỏ.Thay vì làm như thế mình sẽ cho đong 1 lít nước vào Erlen 3lít và bổ sung vào lượng môi trường cho 2 lít mình đem đi nấu,khi môi trường sôi và gần trào ra thì mình bổ sung vào 1 lít nước nữa.Sau đó mình lắc đều rùi phân phối từng chai nhỏ.Với cách làm này mình sẽ có những ưu điểm như sau: hạn chế việc trào môi trường,không phải cân đong lắc nhắc nhưng lượng môi trường vẫn đều cho mỗi chai nhỏ và tiết kiệm được thời gian chờ đợi môi trường hoà tan hoàn toàn agar.Còn nếu mục đích chính của bạn là đổ đĩa thì cân môi trường và bổ sung nước xong thì lắc đều rùi vứt vào nồi hấp là xong

 

[richi]

Cám ơn các bạn rất nhiều, mỗi ý kiến đều có cái hay cho mình học hỏi. Đúng là mình làm như cách mà thecoolwind36 đã nói, mình đun sôi môi trường đã có thạch xong, rồi đổ đĩa, cho vào hấp. Mình đã làm thử theo nhiều cách và thấy rằng các đĩa đã đổ sẵn sau 2 ngày chưa thấy có khuẩn lạc lên, còn các đĩa hấp môi trường và đĩa petri riêng sau đó đem ra đổ thì đều có ít nhất một khuẩn lạc ^^. Mình không có cleanbench, và có lẽ thao tác vô trùng còn chưa tốt.
Khâu đổ đĩa kể như đã giải quyết xong ^^.

Nhờ các bạn chỉ thêm về vụ sấy khô đĩa, làm sao để sấy khô đĩa thạch khi không có cleanbench, không có tủ sấy đây nhỉ?

 

[Lê Tuấn Anh]

chào ban:

- nếu không có cleanbench không biết bạn định cấy và sử dụng sau này như thế nào nữa
- ít ra cũng nên có cái tủ cấy tự chế và có gắn đèn cực tim chứ
- nếu box chưa đảm bảo có thể cho mỗi đĩa vào hộp giấy báo, sao khi khử trùng xong túm bên ngoài giấy báo mở hé nắp trên đĩa ra một chút, chở nguội lại đậy lại (vẫn không xé giấy báo ra)

 

[thecoolwind36]

về vấn đề sấy khô đĩa thì mình chịu vì không có nhiều kinh nghiệm cho lém.Vì công ty mình đang làm việc sử dụng đĩa nhựa(tiệt trùng bằng khí ethylen) sử dụng 1 lần rùi bỏ.Nên thật sự mình ko có quan tâm về những vấn đề như phải hấp bỏ rùi rữa đĩa thủy tinh,rùi sấy khô rùi bọc đem đi hấp như các phòng thì nghiệm thời đại học.Nếu bạn có thắc mắc hay cần hỗ trợ về việc pha chế môi trường hóa chất có thể đưa lên.Mặc dù exp có hạn nhưng mình tin là có thể giúp bạn gỡ bỏ được vài bế tắc khi tự làm kỹ thuật khi không có trang bị máy móc.chúc bạn thành công

 

[Gecko]

đĩa petri muốn khô ráo thì ở ptn mình làm hay gói trong giấy báo (cứ 4 petri gói chung lại) sau đó bỏ vào nilon, buộc kín bằng dây nịt, hấp, lấy ra mở dây nịt bỏ vào tủ sấy set 70 độ để 1 lúc là xài luôn được. Nếu không vội dùng ngay và không có tủ sấy thì sau khi hấp cứ để kín nguyên như thế mà cất đi, giấy báo tự nó hút ẩm nên petri đảm bảo khô ráo khi sử dụng.

Về việc lật úp mặt thạch thì vì thạch của các bạn có nhiệt độ cao, khi đổ thạch xong mà đậy petri lại thì nước ngưng tụ ở nắp petri phía trong sẽ rỏ xuống mặt thach, khả năng bị nhiễm rất cao nên khi thạch đã khô thì úp nó xuống và gói trong giấy báo sạch, khi mang ra xài mặt thạch khô ráo rất tốt.

 

[richi]

Cám ơn các bạn rất nhiều, nhờ các bạn hướng dẫn mà mình hiểu thêm nhiều điều.
Xin hỏi thêm là, cái đĩa petri bản thân nó khi đậy kín thì đã đảm bảo không bị nhiễm từ môi trường ngoài chưa? Hay dù đậy kín vẫn phải đặt vào môi trường sạch khuẩn để tránh nhiễm? Vì mình thấy mấy đĩa của mình đổ xong để vài ngày sau thì cái nào cũng nhiễm cả, kể cả các đĩa đổ xong mới hấp tiệt trùng.
Mình thường gói bằng giấy nhôm, nhưng nếu giấy báo "lợi hại" vậy thì chắc chuyển qua dùng giấy báo thôi ^^.

 

[thecoolwind36]

điều kiện bảo quản của đĩa môi trường là từ 2 đến 8 độ C.Và thời gian bảo quản lâu nhất tối đa là 3 tháng.Nếu để đĩa ở nhiệt độ bình thường và nơi không sạch sẽ khả năng ngoại nhiễm khá cao.Đa phần là ngoại nhiễm mốc và các vi khuẩn hoại sinh có trong không khí

 

[Lê Tuấn Anh]

Cám ơn các bạn rất nhiều, nhờ các bạn hướng dẫn mà mình hiểu thêm nhiều điều.
Xin hỏi thêm là, cái đĩa petri bản thân nó khi đậy kín thì đã đảm bảo không bị nhiễm từ môi trường ngoài chưa? Hay dù đậy kín vẫn phải đặt vào môi trường sạch khuẩn để tránh nhiễm? Vì mình thấy mấy đĩa của mình đổ xong để vài ngày sau thì cái nào cũng nhiễm cả, kể cả các đĩa đổ xong mới hấp tiệt trùng.
Mình thường gói bằng giấy nhôm, nhưng nếu giấy báo "lợi hại" vậy thì chắc chuyển qua dùng giấy báo thôi ^^.

bình thường thì có loại giấy riêng đấy, trông như giấy bao xi măng, bền và dai. vì giá thành tương đối đắt (hình như mình từng mua 5k/tờ). dành tận dụng giấy báo

 

[Đặng Tấn Minh Thụy]

Chào các bạn. Có một giải pháp mà các bạn không cần lo về việc nấu agar, đổ đĩa, rửa đĩa, tủ sấy hay cleanbench: đó là đĩa kiểm vi sinh 3M Petrifilm. Đây là môi trường đông khô, làm sẵn rất thuận tiện trong thao tác. Các bạn chỉ việc chuẩn bị mẫu và cấy 1ml lên đĩa mà thôi. Ngoài ra thời gian cho kết quả cũng rút ngắn rất nhiều, thông thường là 24h (trừ nấm men và mốc là 3 ngày), kết quả chính xác về định tính lẫn định lượng (không cần test sinh hóa lại).
Các bạn tham khảo thêm ở đây: www.thanhphuongco.com.vn

 

[vtcong02]

Xin chào!T xin được góp thêm 1 ý để bảo quản đỉa petri.
Cho đỉa vào bọc nylon, mà bạn phải chọn loại bọc chịu được khử trùng nhiệt ướt nha (loại bọc không dẻo). Cho đỉa vào đây và đem khử trùng nhiệt ướt (121 độ, 20 phút).Bảo đảm không còn nấm or vk nào sống nổi.

 

[richi]

Xin chào!T xin được góp thêm 1 ý để bảo quản đỉa petri.
Cho đỉa vào bọc nylon, mà bạn phải chọn loại bọc chịu được khử trùng nhiệt ướt nha (loại bọc không dẻo). Cho đỉa vào đây và đem khử trùng nhiệt ướt (121 độ, 20 phút).Bảo đảm không còn nấm or vk nào sống nổi.

Hay quá ta, bạn cho hỏi bọc này mua ở đâu và giá cả khoảng thế nào nhỉ?
Thanks