nguyenquocdong89
Senior Member
anh chi nào có protocol ngon ngon về tạo tế bào khả biến cho em xin với.
thank các anh chị.
thank các anh chị.
Protocol tạo tế bào khả biến
- Thread starter nguyenquocdong89
- Start date
Gửi bạn protocol tạo TB khả biến cho E.coli chủng BL21
Phương pháp chuẩn bị tế bào khả biến
a. Nguyên tắc
Màng tế bào vi khuẩn E. coli có thể trở nên khả biến khi được xử lý với ion Ca2+. Ion Ca2+ bao bọc lại các điện tích âm trên phân tử DNA và tăng cường khả năng của chúng xuyên qua màng tế bào.
b. Tiến hành
- Chủng vi khuẩn được cấy ria trên môi trường LB đặc và nuôi qua đêm ở 37oC
- Cấy một khuẩn lạc đơn vào 3 ml môi trường LB lỏng, lắc qua đêm ở 37oC, 200 vòng/phút;
- Chuyển 0,5 ml dịch nuôi trên sang 50 ml môi trường LB lỏng, lắc tiếp khoảng 3 h đến khi OD600nm đạt 0,6 - 0,8 thì chuyển dịch nuôi cấy sang ống ly tâm đã giữ lạnh trên đá
- Ly tâm 6000 vòng/phút, 0oC, 10 phút thu tế bào
- Hoà tan cặn nhẹ nhàng trong 20ml - 30ml 0,1 M CaCl2, giữ trong đá 45 phút, ly tâm ở 6000 vòng/phút, 0oC trong 10 phút thu cặn và hòa cặn nhẹ nhàng trong 0,7 ¸ 1,5 ml CaCl2
- Chia vào mỗi ống Eppendorf 50ml dịch tế bào, bổ sung 50ml glycerol 60%, làm đông lạnh nhanh bằng N2 lỏng và giữ ở -80oC;
- Cấy trải mẫu trên môi trường LB có và không có kháng sinh để kiểm tra.
Phương pháp chuẩn bị tế bào khả biến
a. Nguyên tắc
Màng tế bào vi khuẩn E. coli có thể trở nên khả biến khi được xử lý với ion Ca2+. Ion Ca2+ bao bọc lại các điện tích âm trên phân tử DNA và tăng cường khả năng của chúng xuyên qua màng tế bào.
b. Tiến hành
- Chủng vi khuẩn được cấy ria trên môi trường LB đặc và nuôi qua đêm ở 37oC
- Cấy một khuẩn lạc đơn vào 3 ml môi trường LB lỏng, lắc qua đêm ở 37oC, 200 vòng/phút;
- Chuyển 0,5 ml dịch nuôi trên sang 50 ml môi trường LB lỏng, lắc tiếp khoảng 3 h đến khi OD600nm đạt 0,6 - 0,8 thì chuyển dịch nuôi cấy sang ống ly tâm đã giữ lạnh trên đá
- Ly tâm 6000 vòng/phút, 0oC, 10 phút thu tế bào
- Hoà tan cặn nhẹ nhàng trong 20ml - 30ml 0,1 M CaCl2, giữ trong đá 45 phút, ly tâm ở 6000 vòng/phút, 0oC trong 10 phút thu cặn và hòa cặn nhẹ nhàng trong 0,7 ¸ 1,5 ml CaCl2
- Chia vào mỗi ống Eppendorf 50ml dịch tế bào, bổ sung 50ml glycerol 60%, làm đông lạnh nhanh bằng N2 lỏng và giữ ở -80oC;
- Cấy trải mẫu trên môi trường LB có và không có kháng sinh để kiểm tra.
Chỗ màu đỏ phải thay ml = ul (micro)
nguyenquocdong89
Senior Member
Cái topic này mình up lâu rùi, Mình cũng đã tìm được đáp án rùicác anh chị có protocol làm tế bào khả biến của Agrobacterium không cho em xin với ạ? Nhân đây cũng cho phép em hỏi luôn protocol của web nào là đáng tin tưởng ạ? Vì em lên mạng tìm có cơ man nào là web, không biết chọn cái nào lun
. Thank anh Hưng và cá bạn nhé. Cái mà bạn muốn hỏi là trang nào thì rất khó đây, vì nhièu trang lắm nhưng thường mình lấy trên spinger hoặc NCBI, 2 trang này thì ok, uy tín đó. Thường trên spinger là mất tiền nhưng cũng có bài không mất, nếu bài nào mất tiền bạn cop link rùi xin các anh chị trên diễn đàn, các anh chị sẽ lấy giúp. Nhớ tớ ko? t đang làm ở fong ngày xưa Đông thực tập đấyCái topic này mình up lâu rùi, Mình cũng đã tìm được đáp án rùi
) Many thanks! Tớ hay lấy ở protocol online nhưng nó toàn ở E.Coli thôi. T muốn tìm ở Agro ấy
nguyenquocdong89
Senior Member
Hả? Đang thực tập tại phòng TNTĐ- CNTBTV viện di truyền ah? Bạn lại làm về chuyển gene ah?Nhớ tớ ko? t đang làm ở fong ngày xưa Đông thực tập đấy
mà bạn học trường nào? Híc sao biết tớ trước thực tập tại đó? ah cái bạn muốn tìm thì không phải đi xa đâu, Hỏi luôn anh Chiến đó. Khoản tách dòng gene anh ấy làm rùi mà, pro là đằng khác hihi. Có gì online qua yahoo của tớ , nói nhiều ở diễn đàn lại không đũng chủ đề hihi
yahoo nguyenquocdong89
nguyenquocdong89
Senior Member
Không mình không làm với Pascal, ông Pascal làm bên phòng chú Vịnh, Mình làm bên phòng chú Đồng,
phòng bên Mình làm chủ yếu về chuyển gene thôi (chuyển gene đậu tương và ngô). He he sao Ngà biết tới ông Pascal? Tìm hiểu cũng ác ghê ta 