What's new

nhuộm gram!

loveless

Member
Hôm trước lên diễn đàn có thấy bạn hỏi về nhuộm gram,tuy đã giải thích riêng với bạn ấy rồi nhưng vẫn lập topic này để cho những bạn có nhu cầu tìm hiểu cùng đọc,muốn gửi vào topic kia nhưng tìm mãi không ra!:twisted:

Nhuộm gram là phưưong pháp phân biệt hai loại vi khuẩn bắt màu thuốc nhuộm gram cho màu khác nhau ,sự bắt màu khác nhau này là do tuỳ theo cấu tạo của lớp peptidoglican mà thành tế bào có tínhs chất nhiộm màu phân biệt với thuốc nhuộm gram (do nhà vi khuẩn học người đan mạch Christian Gram phát kiến,để ghi nhận công lao của ông,người ta lấy tên ông đặt cho phương pháp nhuộm này là nhuộm gram )người ta phân biệt hai loại vi khuẩn là vi khuẩn gram âm và vi khuẩn gram dương (Ở vi khuẩn G(+) sau khi nhuộm màu soi trên kính hiển vi chúng bắt màu tím-xanh,còn G(-) bắt màu hồng)
sự bắt màu khác nhau này là do:
Thành tế bào vi khuẩn Gram âm có cấu trúc:
- Peptidoglican là thành phần thứ yếu, ko chứa axit teicoic
- Màng ngoài cấu trúc: protein và lớp đôi photpholipit có khảm protein đặc biệt -> bảo vệ vi khuẩn chống sự thấm yếu tố hóa học bên ngoài, ngăn chặn sự xâm nhập của lizozim
- Khoảng không gian chứa độc tố, các enzim -> phá hủy kháng sinh trước khi tác động lên màng sinh chất
- Cấu trúc nhiều lớp -> bảo vệ
_do cấu tao các lớp màng nên tiên mao của gram (+) thì gốc có 2 vòng khuyên còn vi khuẩn gram (-) gốc có 4 vòng khuyên
_về axitamin gram(+) có 3-4 loại còn gram (-) có 17-18 loại
_tỉ lệ ARN:ADN ở gram (+) là 8:1 còn gram (-) là 1:1
_Gram (+) không có khoang chu chất còn gram (-) có khoang chu chất
-Đầu tiên người ta nhỏ thuốc tím tinh thể (Crystal Violet) thì G+ không có lớp vỏ nhầy bảo vệ nên có màu tím ,G- thì có nên không bắt màu thuốc tím
-Sau đó rửa bằng dd cồn cho trôi lớp vỏ nhầy đi
-Nhỏ dd Fushin thi vi khuẩn G+ có thành tế bào dày hơn nên có màu tim tím đo đỏ ,còn G- có thành tế bào mỏng hơn nên bắt màu đỏ của dd thuốc nhuộm

phương pháp này có tầm quan trọng trong việc sử dụng các laọi kháng sinh đặc hiệu để chống các laọi vi khuẩn !:mrgreen::)
 

loveless

Member
dạ !hic a nói đúng ah!e nhận sai ah!hihi cảm ơn anh đã chỉ bảo !:)(xương anh nhất =))

tại cấu tạo peptidoglican nên mới có sự sai khác,e cắm cúi gõ nên sai mất hì
 
Loveless ơi, em đọc sách thấy có thêm hai đặc điểm mà vi khẩn gram âm khác với gram dương nè:
- Vi khuẩn gram dương có thành murêin dày, nhiều lớp còn thành murêin của vi khuẩn gram âm thì mỏng và ít lớp.
- Vi khuẩn gram âm thì có lớp LPS còn vi khuẩn gram dương thì không.
 

sanhhp

Member
Phương pháp nhuộm vi khuẩn sống
Phương pháp nhuộm Gram do nhà vi khuẩn học Đan Mạch Hans christian Gram (1853 – 1938) phát minh ra từ đầu năm 1884. Nhờ phương pháp này có thể phân biệt vi khuẩn thành hai nhóm lớn: Vi khuẩn Gram dương (Gram – positive) và vi khuẩn Gram âm (Gram – negative)
Phương pháp nhuộm Gram được tiến hành như sau:
- Cố định tiêu bản vi khuẩn bằng ngọn lửa
- Nhuộm thuốc bằng dung dịch tím tinh thể (crystal violet) trong khoảng 1 phút sau đó rửa bằng nước cất
- Nhuộm tiếp bằng dung dịch Iot (dung dịch Lugol) trong khoảng 1 phút sau đó rửa lại bằng nước cất
- Phủ lên vết bôi dung dịch etanol 95% : axeton (1:1) trong khoảng 1 phút sau đó rửa lại bằng nước cất
- Nhuộm tiếp bằng thuốc nhuộm màu đỏ (như safranin hay Fuchsin Ziehl) trong khoảng 30 đến 60 giây sau đó rửa bằng nước cất
- Để khô và soi kính
Kết quả như sau:
Nhóm Gram dương có đặc tính không bị dung môi hữu cơ Etanol, Axeton tẩy phức chất màu giữa tím kết tinh và Iot. Kết quả là màu tím
Nhóm Gram âm bị dung môi hữu cơ tẩy màu thuốc nhuộm ban đầu do đó sẽ bắt màu với thuốc nhuộm bổ sung (đỏ vàng với Safranin, đỏ tía với Fuchsin).
Hai nhóm vi khuẩn Gram dương và Gram âm có các đặc điểm khác nhau cơ bản
thành phần % khối lượng khô của thành tế bào vi khuẩn


Peptidoglican 30 – 95 (đối với Gram dương) 5 - 20 (đối với Gram âm)

Axit teicoic cao (đối với Gram dương) 0 (đối với Gram âm)

Lipoit hầu như không có (đối với Gram dương) 20 (đối với Gram âm)

Protein hầu như không có hoặc ít (đối với Gram dương) cao (đối với Gram âm)

Trong quá trình nhuộm Gram tế bào trước hết được xử lý với tím tinh thể (crystal violet) rồi với Iot. Kết quả là có sự tạo thành phức chất tím tinh thể - Iot bên trong tế bào. Khi phủ lên dung môi hữu cơ Etanol, Axetol thì vi khuẩn Gram âm bị tẩy, lipit của lớp màng ngoài bị tan làm tăng tính thấm của màng dẫn đến sự rửa trôi phức chất tím tinh thể - Iot và làm cho vi khuẩn mất màu. Khi nhuộm bổ sung chúng sẽ bắt màu với thuốc nhuộm này (màu đỏ vàng với Safranin, đỏ tía với Fuchsin).Đối với nhóm gram dương dung môi hữu cơ Etanol, Axetol làm cho các lỗ trong Peptidoglican co lại do đó phức chất tím tinh thể - Iot bị giữ lại trong tế bào./.:up::twisted:
 

Ho Huu Tho

Member
thành phần % khối lượng khô của thành tế bào vi khuẩn

Lipoit hầu như không có (đối với Gram dương) 20 (đối với Gram âm)
Lipoit là thành phần gì vậy nhỉ, mình chỉ nghe đến Lipopolysaccaride, không biết có phải là một không bạn?

Protein hầu như không có hoặc ít (đối với Gram dương) cao (đối với Gram âm)
Không biết thông tin này có đúng không nhỉ, nếu đúng thì đó là protein gì vậy?

Trong quá trình nhuộm Gram tế bào trước hết được xử lý với tím tinh thể (crystal violet) rồi với Iot. Kết quả là có sự tạo thành phức chất tím tinh thể - Iot bên trong tế bào. Khi phủ lên dung môi hữu cơ Etanol, Axetol thì vi khuẩn Gram âm bị tẩy, lipit của lớp màng ngoài bị tan làm tăng tính thấm của màng dẫn đến sự rửa trôi phức chất tím tinh thể - Iot và làm cho vi khuẩn mất màu. Khi nhuộm bổ sung chúng sẽ bắt màu với thuốc nhuộm này (màu đỏ vàng với Safranin, đỏ tía với Fuchsin).Đối với nhóm gram dương dung môi hữu cơ Etanol, Axetol làm cho các lỗ trong Peptidoglican co lại do đó phức chất tím tinh thể - Iot bị giữ lại trong tế bào./.:up::twisted:
Cách giải thích này có vẻ không logic lắm thì phải.
 

sanhhp

Member
anh Huu Tho à cách giải thích đó theo tôi là đúng rồi heheh
còn Protein trong cell wall đối với Gram âm có tỷ lệ cao đó là các loại Protein cơ bản sau:
- Protein cơ chất: chẳng hạn như porin ở vi khuẩn E. coli còn gọi là protein lỗ nằm xuyên suốt màng ngoài và cho phép một số loại phân tử đi qua chúng như đường, axit amin, ion vô cơ,...
- Protein màng ngoài (OMP) có năng lực vận chuyển chuyên biệt một số phân tử khá lớn và đưa chúng đi qua màng ngoài như vtm b12, nucleotit,..
- Lipoprotein rất nhiều chủng loại có vai trò liên kết giữa peptidoglican bên trong với lớp màng bên ngoài
- Lớp không gian chu chất: trong lớp này có nhiều loại protein như proteinaza, nucleaza, protein vận chuyển qua màng, protein thụ thể:twisted:
 

Ho Huu Tho

Member
Trong quá trình nhuộm Gram tế bào trước hết được xử lý với tím tinh thể (crystal violet) rồi với Iot. Kết quả là có sự tạo thành phức chất tím tinh thể - Iot bên trong tế bào. Khi phủ lên dung môi hữu cơ Etanol, Axetol thì vi khuẩn Gram âm bị tẩy, lipit của lớp màng ngoài bị tan làm tăng tính thấm của màng dẫn đến sự rửa trôi phức chất tím tinh thể - Iot và làm cho vi khuẩn mất màu. Khi nhuộm bổ sung chúng sẽ bắt màu với thuốc nhuộm này (màu đỏ vàng với Safranin, đỏ tía với Fuchsin).Đối với nhóm gram dương dung môi hữu cơ Etanol, Axetol làm cho các lỗ trong Peptidoglican co lại do đó phức chất tím tinh thể - Iot bị giữ lại trong tế bào./.:up::twisted:
Bạn xem lại những chỗ in đậm xem có đúng không, mình thấy cơ chế bạn thanhphu nêu ở đầu topic ngắn gọn mà có vẻ đúng hơn thì phải?
 

sanhhp

Member
Theo mình thì đúng vì đối với Gram âm do có Lipit nên tan trong cồn dẫn đến rửa trôi.
Mình cũng đã sợ nhầm nên tìm lại tài liệu thấy cũng nói như vậy. Thế theo anh Tho thì nên giải thích như thế nào?:twisted:
 

Ho Huu Tho

Member
anh Huu Tho à cách giải thích đó theo tôi là đúng rồi heheh
còn Protein trong cell wall đối với Gram âm có tỷ lệ cao đó là các loại Protein cơ bản sau:
- Protein cơ chất: chẳng hạn như porin ở vi khuẩn E. coli còn gọi là protein lỗ nằm xuyên suốt màng ngoài và cho phép một số loại phân tử đi qua chúng như đường, axit amin, ion vô cơ,...
- Protein màng ngoài (OMP) có năng lực vận chuyển chuyên biệt một số phân tử khá lớn và đưa chúng đi qua màng ngoài như vtm b12, nucleotit,..
Trên đây đều là các protein của màng ngoài, chứ có phải protein của thành tế bào đâu bạn?
- Lipoprotein rất nhiều chủng loại có vai trò liên kết giữa peptidoglican bên trong với lớp màng bên ngoài
Tôi chưa đọc thấy thông tin này, bạn có thể cho biết đã đọc thấy ở đâu không?
- Lớp không gian chu chất: trong lớp này có nhiều loại protein như proteinaza, nucleaza, protein vận chuyển qua màng, protein thụ thể:twisted:
Đây có phải là không gian giữa màng trong và màng ngoài không? Nếu đúng thì protein vận chuyển qua màng gắn liền với cấu trúc của các màng, chứ theo mình không thể tách ra được. Còn những thứ proteinaza với nuleaza có tác dụng gì đối với vi khuẩn gram âm, bạn có thể cho biết được không, mình cũng chưa được biết về cái này.
 

Ho Huu Tho

Member
Theo mình thì đúng vì đối với Gram âm do có Lipit nên tan trong cồn dẫn đến rửa trôi.
Mình cũng đã sợ nhầm nên tìm lại tài liệu thấy cũng nói như vậy. Thế theo anh Tho thì nên giải thích như thế nào?:twisted:
Mình đọc tài liệu trong sách nước ngoài thấy họ trình bày ngắn gọn cơ chế này ở đường link sau: Cơ chế nhuộm Gram. Gửi để bạn tham khảo thêm.
 

loveless

Member
cai nay em chiu roi nhung ma lipoit thi e chua nghe bao gio cung chua biet cai goi la thanh murein la cai gi em chiu luon!ma may e hu vk moi nguoi dung banned nick em nha
 

sanhhp

Member
lớp không gian chu chất bao gồm ở giữa lớp màng ngoài và lớp PG mỏng ở thành tế bào Gram âm, ngoài ra còn có ở giữa lớp thành tế bào và lớp màng tế bào chất của vi khuẩn Gram âm và dương:twisted:
 
Bạn đọc được thông tin về murein ở đâu vậy, hay nó chính tên gọi khác của peptidoglycan?

OK. Tên sách :'' Rèn luyện kĩ năng sinh học 10'' trang 159, nhà xuất bản Giáo Dục. Tác giả viết sách: Nguyễn Đức Thành - Trần Thị Thanh Bình - Lê Hồng Diệp.
 

Similar threads

Facebook

Top