Cách pha buffer

[HoaLamTu]

em đang tìm cách pha dung dịch đệm để pha enzyme alpha glucosidase
em đã tìm được 2 loại bufer có thể dùng được là:
1. 50mM NaOAc buffer,pH=4,5 (acetate buffer)
2. 0.1M sodium phosphate buffer, pH=6,9
Nhưng em không rõ cách pha 2 loại đấy như thế nào cả?
mọi người giúp em được không ạ?
Thanks mọi người nhiều!

 

[vucongphong]

Đây là 2 đệm rất phổ biến. Bạn có thể xem các sách thực tập hóa sinh đều có cách pha

Đối với đệm Natri acetate 0.05M, pH =4.5 ở 25 độ

19.36ml dung dịch muối natri acetate 1M + 30.64 ml dung dịch acetic acid 1M sau đó thêm nước thành 1000ml.

Đối với đệm natri phosphate 0.1 M, pH 6.9 ở 25 độ:
Bạn lấy 215.4 ml dung dịch NaH2PO4 0.2 M + 284.6 ml dung dịch Na2HPO4 0.2 M sau đó thêm nước thành 1000ml.

 

[Lê Ngọc Hưng]

Đây là 2 đệm rất phổ biến. Bạn có thể xem các sách thực tập hóa sinh đều có cách pha

Đối với đệm Natri acetate 0.05M, pH =4.5 ở 25 độ

19.36ml dung dịch muối natri acetate 1M + 30.64 ml dung dịch acetic acid 1M sau đó thêm nước thành 1000ml.

Đối với đệm natri phosphate 0.1 M, pH 6.9 ở 25 độ:
Bạn lấy 215.4 ml dung dịch NaH2PO4 0.2 M + 284.6 ml dung dịch Na2HPO4 0.2 M sau đó thêm nước thành 1000ml.

Bạn ơi, chưa hẳn đã chính xác. Vì:
+Với nồng độ natri acetate 0.05M thì okie rồi
+Còn thêm 30.64Ml acetic acid 1M thì có vấn đề. Bởi vì,
Mục đích thêm acid vào để chuẩn pH. Nhưng với nước cất, không phải lúc nào pH cũng bằng 7 cả. Và mỗi nơi nước cất có pH khác nhau (ngay như trong ptn của mình, mỗi lần cất nước có 1 pH khác nhau).
Tốt nhất sau khi pha muối trong nước cất xong, bạn chuẩn pH bằng máy đo pH bằng dung dịch acid acetic. Khi nào pH=4.5 là okie

Mình xin góp ý vậy thui

 

[Lê Ngọc Hưng]

Tương tự với các loại đệm khác cũng thế.
+Cân, pha cho đúng nồng độ các muối.
+Định mức.
+Chuẩn pH bằng dung dịch axit hay bazo của các muối tương ứng.

(phần dịch axit hay bazo thêm vào không đáng kể so với thể tích, nên sai số không đáng kể lun )

 

[sinhvienhanoi]

bạn google buffer calculator se đủ hết đây là một ví dụ

http://www.biomol.net/en/tools/buffercalculator.htm

 

[vucongphong]

thanks các bạn đã góp í. Một điều tất nhiên là bất kì khi làm thí nghiệm, đặc biệt là về enzym mà có sự yêu cầu khắt khe về pH thì tất nhiên là phải kiểm tra pH trước khi tiến hành. Theo mình nếu mà hóa chất chuẩn (Merk, Sigma) và sử dụng nước deion thì cũng không nhất thiết phải kiểm tra pH vì đôi khi nếu sử dụng máy pH không đúng, dung dịch chuẩn có vấn đề thì lại là một tai hại hơn.