Tế bào chết trong vòng 5 phút - Mọi người đã gặp bao giờ chưa?

[Pretender]

Cho em hỏi mọi người đã ai gặp trường hợp tế bào chết sạch chỉ sau 5 phút đổi môi trường chưa ạ? Em đổi từ môi trường thường sang môi trường không có antibiotics để transfect, nhưng chỉ 5 phút sau là tế bào detach và nổi lềnh phềnh hết cả. Thông thường em transfect trong 6well plate, tế bào trong khoảng 2 wells sẽ chết sạch sẽ, 4 wells còn lại thì chết hơn 1 nửa... Nếu transfect chỗ tế bào sống sót ấy thì transfection vẫn efficient bình thường...

Em đã thử đổi môi trường mới, thử "nhẹ tay" hơn lúc plate tế bào nhưng mà không khá hơn tý nào cả.. Ai có kinh nghiệm cứu em với, em đau khổ vì vấn đề này 3 tuần nay rồi, giờ chẳng biết làm gì chỉ toàn rung đùi lướt web thôi!!!

Bổ sung thêm là trước khi vấn đề này xảy ra tế bào transfected của em sống rất hạnh phúc trong môi trường không có antibiotics cả 72h cũng không sao cả.. Sao tự nhiên gần Noel nó lại như thế???

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Muốn biết nó chết hẳn chưa thì phải nhuộm Trypan đã chứ.
Tế bào mà chết nhiều thì chắc do trypsin mạnh quá. Một số loại tế bào không xài trypsin được mà chỉ xài EDTA & cell scraper. Không biết bạn có kiểm tra cái này không?

 

[Pretender]

Tế bào chắc chết là vì nó detach hẳn khỏi bề mặt, 1 số khác còn có thể thấy rõ membrane đang bị vỡ, hiện tượng giống như hypotonic ấy

Trước giờ em vẫn trypsin trong dd Trypsin/EDTA bình thường mà. Hơn nữa em toàn split và plate tế bào cùng lúc nên về mặt handling chắc không khác nhau được, mà tế bào grow trong 10cm dish thì vẫn sống bình thường, chỉ tế bào plate để transfect mới chết thôi, mà cũng chỉ chết khi đổi sang môi trường không có antibiotics... Lần sau em có nên plate thẳng luôn vào môi trường không có antibiotics không? hay là giảm thời gian trypsinize xuống?? Hichic