Dialysis tube

[Nguyễn Ngọc Lương]

Bác nào làm protein có biết dialysis tube để desalting thì cut-off khoảng bao nhiêu nhỉ? 6-8 kDa à?
Thường công ty nào bán dialysis tube dưới 6-8 kDA nhỉ? Thằng Sigma toàn chơi cut-off khoảng 10-12 kDa.

 

[Nguyễn Xuân Hưng]

Em tưởng còn tuỳ mục đích chứ, nếu không quan tâm đến mấy protein dưới 10kDa thì kệ nó thôi.

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Vấn đề là khi nó bảo cut-off là 10 thì có khi 16kDa cũng cuốn gói luôn.
Protein quan tâm thì 11kDa, nên khả năng cut-off 6-8 cũng risky. Tốt nhất là 1kDa nhưng không biết chỗ nào bán. Desalt column có vẻ khả thi hơn nhưng không biết có đắt không vì nó chỉ dùng cho mỗi mục đích desalt.

 

[Nguyễn Xuân Hưng]

Không biết bác Lương còn cần nữa không. Độ này tự nhiên phải đi purify mAb nên đi ngó nghiêng thế nào tìm được cái centriprep YM-3 của millipore có MWCO = 3kDa, Cat. No. 4302. Em lười quá bác thử ngó xem bọn này có MWCO 1kDa không rồi cho bà con biết với nhé.

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Úi giời, xài loại này loại này nhanh...bán nhà

 

[Nguyễn Xuân Hưng]

Úi giời, xài loại này loại này nhanh...bán nhà

Úi thế à, em có để ý giá đâu, bao tiền 1 ống vậy để em xin ít vác về VN bán .

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Không phải đắt, mà là scale ấy. Ở lab cũng đang xài 1 cái của millipore loại đấy nhưng chả ăn thua (theo lời con bé làm về enzyme). Cuối cùng vẫn quay lại với truyền thống là salting-out + dialysis rồi FPLC. Nếu bên đó làm antibody thì scale các thứ chắc nhỏ (ví dụ lấy huyết tương chẳng hạn).

 

[Nguyễn Xuân Hưng]

Không phải đắt, mà là scale ấy. Ở lab cũng đang xài 1 cái của millipore loại đấy nhưng chả ăn thua (theo lời con bé làm về enzyme). Cuối cùng vẫn quay lại với truyền thống là salting-out + dialysis rồi FPLC. Nếu bên đó làm antibody thì scale các thứ chắc nhỏ (ví dụ lấy huyết tương chẳng hạn).

Vâng nhỏ thôi, với tái sử dụng column được.

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Đc Hưng xài cái đó như thế nào thế? Trong manual nó bảo desalting thì dùng YM-3, spin 7500 g nhưng chả nói mấy phút.

 

[Nguyễn Xuân Hưng]

Đc Hưng xài cái đó như thế nào thế? Trong manual nó bảo desalting thì dùng YM-3, spin 7500 g nhưng chả nói mấy phút.

Em không xài cái này, chỉ ngó thấy thì kể ra thôi. Manual không nói bao lâu vì tuỳ thuộc vào dung dịch đầu vào. Thường em làm thì phải thử trước một lần cứ ly tâm 5 phút một tới thể tích cô đặc mong muốn của mình. Sau đó thì rút ra thời gian cần để đạt độ cô đặc nhất định cho dung dịch đầu vào nhất định là bao nhiêu rồi sau đó cứ thế làm.

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Oạch, hóa ra thằng này chỉ để cô đặc là tốt. Tức nó giảm thể tích xuống thôi. Thử desalt quay 50 phút 8000 rpm cũng chả thấy nó flow xuống bao nhiêu. Còn bị GS giảng đạo cho một hồi nhức cả óc.
Hèn gì thấy để mốc meo trong lab chả ai xài.

 

[Nguyễn Xuân Hưng]

Oạch, hóa ra thằng này chỉ để cô đặc là tốt. Tức nó giảm thể tích xuống thôi. Thử desalt quay 50 phút 8000 rpm cũng chả thấy nó flow xuống bao nhiêu. Còn bị GS giảng đạo cho một hồi nhức cả óc.
Hèn gì thấy để mốc meo trong lab chả ai xài.

Cứ phải thử mới biết . Vì bác dùng MWCO có 3kDa nên quay lâu là phải rồi chứ tầm 50kDa hay 100kDa thì quay nhanh lắm.

 

[rubik85]

Concentrating or dilaysis is not that much complicated. The thing here is that you choose the best and available condition, and you must accept the loss of you protein. That's all. Don't think much.

 

[sinhvienhanoi]

for desalting the best way is to perform reverse phase HPLC using C18 material!

 

[sinhvienhanoi]

then elute by volantile buffer,