1 câu hỏi nho nhỏ về western blot

[Dương Văn Cường]

Hôm nay vừa nghe sếp nói về cái này, lôi ra hỏi các bạn tý Vì box này chưa có bài nào mà

Trong khi làm thí nghiệm nếu làm western blot không có phản ứng thì có khi người ta chưa vội kết luận là kháng nguyên - kháng thể trong phản ứng đó không match. Người ta sẽ làm thêm một assay nữa là phản ứng miễn dịch huỳnh quang để kiểm chứng kết quả trước.

Vậy bạn bít nguyên nhân không

 

[linhtinh]

Molecular Biology Problem Solver: A Laboratory Guide.
Edited by Alan S. Gerstein
Copyright © 2001 by Wiley-Liss, Inc.
ISBNs: 0-471-37972-7 (Paper); 0-471-22390-5 (Electronic)

Chapter 13. Western Blotting
Peter Riis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 373

 

[VanKiemsau]

em khong hieu y anh don'tcry hoi o day la western blot gi. em có doc sách viêt về western blot: western blot là quá trình protein-protein kết hợp đặc hiệu với nhau. Thường thì người ta sẽ sử dụng antibody protein co gắn phóng xa hoặc gắn huỳnh quang để phát hiện một loại protein nào đó đúng không ạ. Như vậy thì có sự khác biệt gì giữa về mặt bản chất giữa western blot với phản ứng miễn dịch huỳnh quang ma anh nói ơ trên không ạ.
hy vong anh chị giải đáp giúp em.

 

[Nguyễn Thị Phương Trang]

Phản ứng miễn dịch huỳnh quang về bạn chất thì giống hệt với WB (cũng là phản ứng kháng ngyên kháng thể), các bước làm cũng giống với làm WB (nghĩa là cũng chạy điện di SDS- PAGE và chuyển qua màng), nhưng đến bước cuối cùng là phản ứng hiện màu thì bạn dùng 1 loại hóa chất hiện màu khác có gắn huỳnh quang, sau đó đem soi dưới máy soi huỳng quang. Phản ứng này nhạy hơn so với WB rất nhiều, chỉ cầ 1 chút xíu liên kết kháng nguyên- kháng thể là cũng nhìn sẽ thấy trên fim ngay

 

[Lê Hồng Đức]

Trong khi làm thí nghiệm nếu làm western blot không có phản ứng thì có khi người ta chưa vội kết luận là kháng nguyên - kháng thể trong phản ứng đó không match. Người ta sẽ làm thêm một assay nữa là phản ứng miễn dịch huỳnh quang để kiểm chứng kết quả trước.

Không có phản ứng là sao? Làm thí nghiệm bạn có chứng dương không (là một protein chắc chắn sẽ phản ứng với kháng thể bậc một)? Chứng này đảm bảo Western blot của bạn hoạt động và loại bỏ các nguyên nhân khác, ví dụ cộng hợp và kháng thể một không phản ứng, enzyme gắn trên cộng hợp không hoạt động, cơ chất hỏng, hoặc đơn giản là bạn quên một trong các bước của Western blot.

Từ kinh nghiệm bản thân, mình không nghĩ PƯ miễn dịch huỳnh quang có độ nhạy cao hơn Western blot (cộng hợp phổ biến là HRP). Có chăng là cộng hợp gắn phóng xạ.

 

[Cao Xuân Hiếu]

Từ kinh nghiệm bản thân, mình không nghĩ PƯ miễn dịch huỳnh quang có độ nhạy cao hơn Western blot (cộng hợp phổ biến là HRP). Có chăng là cộng hợp gắn phóng xạ.

Độ nhạy là phụ thuộc chính vào loại signal và hệ detector. Các tín hiệu huỳnh quang hoặc phóng xạ thì chắc chắn có độ nhạy (lượng cơ chất tối thiểu có thể tìm được) tốt hơn các pp nhuộm hóa chất thông thường.

@Trang: từ ngày đổi tên thật thì chẳng thấy bạn post bài nữa. Hồi trước thảm nào tớ cứ thấy có cái gì đó quen quen bây giờ đọc lại mới biết hóa ra "10 năm "bạn" cũ".