Sequencing

[xuhui1990]

Em thấy ở lab e khi trong quá trình phân lập gen, mỗi lần gửi đi sequece đều insert PCR product vào TOPO TA cloing.
Anh chị có thể giải thích cho em được ko?tại sao ko gửi trực tiếp PCR product đi sequence?

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Là vì mồi giải trình tự là những mồi thiết kế sẵn, có trong các kit giải trình tự rồi. Nếu bạn không gắn vào vector thì người ta cũng gắn vào cho bạn khi giải trình tự. Chứ chẳng lẽ mỗi lần giải trình tự lại phải gửi mồi kèm theo sp của bạn à.
Mà sản phẩm PCR đằng nào chẳng phải clone nó vào vector để cất.
Hơn nữa nếu bạn muốn được các Nu đọc có chất lượng thì các đầu gắn mồi phải cách một khoảng kha khá so với cái đoạn bạn định lấy trình tự, vì là các đầu này thường cho các kết quả không chắc chắn lắm (không biết thực sự là Nu nào ở chỗ nào).

 

[viet23ht]

Giải trình tự trực tiếp từ sản phẩm PCR thì phải gửi kèm mồi nhưng kết quả là mất vài chục nu sát phía mồi không xác định trình tự chính xác. Có thể dùng mồi "lồng" để tiến hành giải trình tự đoạn gen cần thiết.

 

[hamon]

Theo như em được biết thì cấu trúc của máy sequencing tương tự như công việc điện di của mình, chỉ khác là sử dụng hệ thống mao quản để phân tích. nếu sản phẩm PCR của mình chỉ có một băng đặc hiệu thì có thể dùng trực tiếp sản phẩm PCR để sequencing. Trong trường hợp có nhiều băng thì mới cần tinh sạch và đưa vào vector để nhân dòng, rồi mới sequencing. Không biết em hiểu như thế đã đúng hay chưa? Rất mong các bác giúp em để em hiểu rõ hơn về vấn đề này. Nhân tiện, nếu bác nào có tài liệu về vấn đề sequencing có thể gửi cho em qua mail thuha2961984@gmail. com, để em đọc thêm được không ạ? Em cảm ơn rất nhiều ạ.