Thân chào diễn đàn
Hiện nay em đang nghiên cứu về việc tinh sạch TAP tag protein ở nấm men. Em đang gặp một số vấn đề, mong được diễn đàn giúp đỡ.
Protein của em là một complex, nằm trong nấm men, một trong số các subbunit của complex đó được gắn với đuôi TAP.
Đầu tiên, em đã so sánh và nhận diện protein của em bằng phương pháp dot blot ở quy mô 10 mũ 6 tế bào/ ml (so với RPB3). Sau đó, tế bào của em được nuôi lên 2 lit, đến OD 10 thì thu hoạch và phá tế bào bằng bead beater, sau đó cũng dot blot phần supernatan và pellet để check khả năng tan và không tan của protein đó. Protein của em chiểm tỉ lệ lớn ở phần không tan.
Cuối cùng em đã tiến hành nuôi nấm men bằng fermentor (200 lit), đến OD 8 thì thu hoạch tế bào. Bước này cần đến 28 giờ. Tương tự tế bào cũng được thu hoạch và phá bằng bead beater loại lớn. Nhưnng khôgn hiểu sao lần này, cả pellet và supernatan đều không nhận diện được protein. Em không hiểu là vấn đề gì đang xảy ra, mong diễn đàn giúp đỡ
Hiện nay em đang nghiên cứu về việc tinh sạch TAP tag protein ở nấm men. Em đang gặp một số vấn đề, mong được diễn đàn giúp đỡ.
Protein của em là một complex, nằm trong nấm men, một trong số các subbunit của complex đó được gắn với đuôi TAP.
Đầu tiên, em đã so sánh và nhận diện protein của em bằng phương pháp dot blot ở quy mô 10 mũ 6 tế bào/ ml (so với RPB3). Sau đó, tế bào của em được nuôi lên 2 lit, đến OD 10 thì thu hoạch và phá tế bào bằng bead beater, sau đó cũng dot blot phần supernatan và pellet để check khả năng tan và không tan của protein đó. Protein của em chiểm tỉ lệ lớn ở phần không tan.
Cuối cùng em đã tiến hành nuôi nấm men bằng fermentor (200 lit), đến OD 8 thì thu hoạch tế bào. Bước này cần đến 28 giờ. Tương tự tế bào cũng được thu hoạch và phá bằng bead beater loại lớn. Nhưnng khôgn hiểu sao lần này, cả pellet và supernatan đều không nhận diện được protein. Em không hiểu là vấn đề gì đang xảy ra, mong diễn đàn giúp đỡ
