Nhuộm ADN

[Hà Thị Minh Thi]

Xin chào mọi người!
Những ai đã điện di ADN và nhuộm gel bằng Ethidium bromide đều rất sợ khả năng gây ung thư của hoá chất này. Có một phương pháp nhuộm ADN trên gel agarose rất an toàn bằng cách dùng Xanh methylene. Mình chỉ mới biết phương pháp này qua tài liệu chứ chưa thực hiện bao giờ. Ai đã từng áp dụng phương pháp này rồi xin vui lòng chia sẻ kinh nghiệm với mọi người nhé.

 

[Nguyễn Phước Hùng]

bạn có thể đưa ra protocol cho các dùng xanh methylen được ko? Hiện nay theo mình thấy kể cả nước ngoài hay việt nam vẫn dùng EtBr sau khi diện di hoặc là cho sẵng EtBr vào trong quá trình đổ gel.

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Em chưa làm thử, nhưng chị Thi thử làm theo các phương pháp này xem:
http://www.yousendit.com/download/Q01GQndHRStnYU0wTVE9PQ
Thử làm theo pp crystal violet xem. Có vẻ như rất đơn giản.

 

[Hà Thị Minh Thi]

Protocol nhuộm bằng Xanh Methylene cũng rất đơn giản. Nếu ai có điều kiện thì thử làm rối post kết quả lên nhé
Methylene Blue DNA staining protocol<?xml:namespace prefix = o ns = "urn:schemas-microsoft-comfficeffice" /><o></o>
Protocol: <o></o>
1. Load 2-5X the amount of DNA that would give bands of moderate intensity on an ethidium bromide stained gel. Typically this is something on the order of 0.5-2.5 µg of a 1 kb fragment on a 30 ml 1% mini gel. These numbers are guess-timates so your milage may vary. <o></o>
2. Run the gel normally and then place in a 0.002% methylene blue (w/v, Sigma M-4159) solution in 0.1X TAE (0.004M Tris 0.0001 M EDTA) for 1-4 h at room temp (22°C) or overnight at 4°C. Diffusion of the DNA does not seem to be a problem for fragments as small as 100 bp (3% Nusieve:1%agarose gel). This avoids background issues associated with staining with 0.02% methylene blue for 30-60 min and then destaining for what seems to be forever <o></o>
3. If destaining is needed to increase the visibility of the bands place the gel in 0.1X TAE with gentle agitation changing the buffer every 30 - 60 min until you are satisfied with the degree of destaining. <o></o>
Notes: <o></o>
This method primarily eliminates the damage of DNA by uv irradiation. DNA isolated from MB stained gels should transform frozen competant E. coli (XL1-Blue and DH5) cells on the order of 20-50 fold more efficiently than EB isolated DNA. Factors influencing improved efficiency are: time factor (degradation, etc.), transilluminator wavelength and intensity, and the %AT of your DNA to mention a few. One of the advantages of MB staining is the elimination of several of the variables. <o></o>
Both FMC GTG agarose and Nusieve GTG perform very well. Synergel is incompatible with MB (very high background). MB should be compatible with polyacrylamide (even less of a background problem). <o></o>
NuSieve:Agarose (3:1, 4% final) gels stain very nicely and dsDNA as small as 75 bp is easily visualized. <o></o>

 

[Lê Đức Dũng]

tui làm rrồi , nhưng khá lâu rồi... nhưng mà Pót cái gì lên cơ???

 

[Hà Thị Minh Thi]

tui làm rrồi , nhưng khá lâu rồi... nhưng mà Pót cái gì lên cơ???

Nếu bạn đã làm rồi thì vui lòng post hình ảnh gel bạn đã chụp đấy, vì mình muốn biết các băng có rõ hay không, có thể ứng dụng trong thí nghiệm hoặc để sinh viên thực hành được không (để giảm khả năng nhiễm EB). Nếu bạn có những nhận xét và so sánh gì giữa phương pháp này và phương pháp nhuộm EB thì cho mình biết với. Cám ơn bạn nhiều.

 

[viet23ht]

Tôi nghĩ là giảng dạy bằng video clip là hay hơn cả.
Không phải sinh viên nào cũng được tiếp xúc với các phương pháp thực hành với hoá chất vì nước ta quá nghèo.
Nếu cần tôi sẽ chia sẻ kinh nghiệm phát hiện ADN bằng nhuộm EB, nhuộm bạc, gắn huỳnh quang để làm giáo cụ cho các bạn.
Khi nào tôi rảnh sẽ share cho ai có nhu cầu.

 

[Hà Thị Minh Thi]

Tôi nghĩ là giảng dạy bằng video clip là hay hơn cả.
Không phải sinh viên nào cũng được tiếp xúc với các phương pháp thực hành với hoá chất vì nước ta quá nghèo.
Nếu cần tôi sẽ chia sẻ kinh nghiệm phát hiện ADN bằng nhuộm EB, nhuộm bạc, gắn huỳnh quang để làm giáo cụ cho các bạn.
Khi nào tôi rảnh sẽ share cho ai có nhu cầu.

Những kinh nghiệm của bạn sẽ hữu ích cho tôi lắm. Mong bạn sớm chia sẻ nhé. Cám ơn bạn nhiều.

 

[viet23ht]

nhuộm ADN

Bạn gửi địa chỉ Gmail cho mình, khi nào có clip hoặc tài liệu cụ thể mình sẽ gửi cho.