polyclone antibodies

[Nguyễn Thành Đạt]

hiện tại, tôi chuẩn bị làm về kháng thể đa dòng, tài liệu cũng hòm hòm, những vẫn còn nhiều băn khoăn lắm, ai đã từ làm rùi có thể share kỹ thuật làm và những kinh nghiệm dẫn đến thành công được không. Mình định làm trên vật chủ là thỏ, và chạy qua cột protein G.thanks!!

 

[Nguyễn Xuân Hưng]

hiện tại, tôi chuẩn bị làm về kháng thể đa dòng, tài liệu cũng hòm hòm, những vẫn còn nhiều băn khoăn lắm, ai đã từ làm rùi có thể share kỹ thuật làm và những kinh nghiệm dẫn đến thành công được không. Mình định làm trên vật chủ là thỏ, và chạy qua cột protein G.thanks!!

Bạn nên nêu rõ còn băn khoăn chỗ nào để mọi người cùng thảo luận.

Thân,

 

[Nguyễn Thành Đạt]

cảm ơn anh đã trả lời, hiện tại mình băn khoăn ở chỗ.
Thứ nhất: mình tìm các tài liệu nhưng chưa thấy tài liệu nào nói về " độ tinh sạch của kháng thể sau khi chạy qua cột", điều này làm mình phân vân, cũng biết rằng Protein A hoặc G có khả năng gắn cao với kháng thể IgG "tùy theo từng loài". vậy ai biết các xác định về độ tinh sạch của kháng thể sau khi chạy qua cột có thể share cho mình được không.
Thứ hai: chúng ta đều biết huyết thanh chứa một lượng lớn các loại protein, nhưng theo các tài liệu tôi đọc được hầu hết họ chỉ đem loại lipid "delipidation" bằng Seoclear và loại vợi các protein khác bằng ly tâm . ngay sau khi loai bằng các bước trên họ load ngay lên cột Protein A hoặc G. Cho mình hỏi ở đây ly tâm chỉ có khả năng loại một chút protein chu không có khả năng loại được đa số các pro tein khác mà mình không quan tâm, có lên loại thêm một bước bằng amonisulphat không và đem thẩm tích như vậy khi đem dịch thẩm tích load lên cột thì khả năng bắt cặp với protein A or G cao hơn, đành rằng rủi do khi IgG của mình có khả năng cung bị loại theo con đường amonisulphat.
mong các bạn chỉ giúp! thanks

 

[tranphuong]

ai có tài liệu kháng thể đa dòng giúp em với huhuhu
sao em tim trên mạng mà không có

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Không biết mục đích làm polyAb để làm gì. Chỗ mình để làm Western và ELISA thì sau khi lấy máu chuột (orbital bleeding) xong, để cho máu đông lại rồi li tâm thu huyết tương và xài trực tiếp làm antibody. Độ pha loãng là 1:10000 hoặc 1:5000.
Nghe nói thỏ làm còn dễ hơn vì thỏ có thể mua đại ngoài chợ về để làm. Có điều lượng antigen chắc chắn sẽ lớn hơn khi tiêm chuột.