Streptokinase

[Thạch Thành Trung]

Hiện tại mình đang làm cái seminar về streptokinase,và muốn trao đổi, cũng như mong nhận được sự giúp đỡ của mọi người.
Có hai tài liệu mà search hoài không được dạng fulltext, mong tiền bối nào hảo tâm cho em xin.
Cảm ơn nhiều nhiều!!!
1. Castellino, F. J., J. M. Sodetz, W. J. Brockway, and G. E. Siefring, Jr. 1976.
Streptokinase. Methods Enzymol. 45:244–257.
2. Saksela, O. 1981. Radial caseinolysis in agarose: a simple method for detec-
tion of plasminogen activators in the presence of inhibitory substances and
serum. Anal. Biochem. 111:276–282.

 

[Nguyễn Xuân Hưng]

Hiện tại mình đang làm cái seminar về streptokinase,và muốn trao đổi, cũng như mong nhận được sự giúp đỡ của mọi người.
Có hai tài liệu mà search hoài không được dạng fulltext, mong tiền bối nào hảo tâm cho em xin.
Cảm ơn nhiều nhiều!!!
1. Castellino, F. J., J. M. Sodetz, W. J. Brockway, and G. E. Siefring, Jr. 1976.
Streptokinase. Methods Enzymol. 45:244–257.
2. Saksela, O. 1981. Radial caseinolysis in agarose: a simple method for detec-
tion of plasminogen activators in the presence of inhibitory substances and
serum. Anal. Biochem. 111:276–282.

Muốn thảo luận thì post vào đây là đúng rồi. Mà muốn trao đổi gì thì cần nói rõ, ít nhất cũng đưa ra một vài nhận định của mình.

Còn muốn lấy tài liệu thì mời vào box khác kẻo các bác admin độ này đang vắt óc nghĩ cách kiếm 7,4 triệu nên dễ cáu, xóa bài thì ráng chịu nhé.

 

[Thạch Thành Trung]

Streptokinase là một enzyme thuộc nhóm protease có khả năng tác động lên plasminogen tự do hay liên kết với fibrin để tạo nên một phức hợp hoạt hóa chuyển đổi plasminogen thành plasmin, có tác dụng thủy phân các sợi fibrin (nguyên nhân đông máu), nên có khả năng làm tan các cục máu đông trong mạch máu. Do đó streptokinase được sử dụng nhiều trong y dược như một tác nhân chống đông máu (thrombolytic agent).
Hiện nay Streptokinase được nghiên cứu nhiều trên giống Streptococcus, thuộc các nhóm A, C, và G, nhưng chủ yếu tập trung vào nhóm C, điển hình là S. equimilis.
Nhu cầu ứng dụng thực tế đòi hỏi một lượng streptokinase tinh sạch nên những nghiên cứu tạo dòng enzyme này khá phổ biến, nhằm thu một lượng lớn enzyme tinh sạch có hoạt tính cao, và host cell chủ yếu là một số dòng E.coli cùng với vector kèm.
Em search được một số tài liệu nói về qui trình thu nhận, tinh sạch, cũng như định hoạt tính của Streptokinase, nhưng không được nhất quán ở nhiều tác giả khác nhau, nên mong muốn được trao đổi những thông tin về đối tượng này, không biết ở nước mình có trung tâm, hay lab nào làm về enzyme này chưa.
Từ những bài báo tham khảo được, em thấy đa số tác giả sử dụng phương pháp đo hoạt tính Streptokinase dựa vào hai tài liệu đã được công bố này:
1. Castellino, F. J., J. M. Sodetz, W. J. Brockway, and G. E. Siefring, Jr. 1976.
Streptokinase. Methods Enzymol. 45:244–257.
2. Saksela, O. 1981. Radial caseinolysis in agarose: a simple method for detec-
tion of plasminogen activators in the presence of inhibitory substances and
serum. Anal. Biochem. 111:276–282.
Nhưng em search hoài mà không được, hi vọng tiền bối nào có thì chia sẽ. Hi

 

[Thạch Thành Trung]

Streptokinase được ứng dụng chủ yếu trong ngành dược, làm thuốc chữa trị một số chứng như:
- Nhồi máu cơ tim cấp
- Huyết khối tĩnh mạch sâu, tắc nghẽn động mạch
- Có khả năng làm vaccine
Hiện tại có rất nhiều sản phẩm chứa streptokinase, chủ yếu ở dạng thuốc như Durokinase, Shankinase, ….
http://www.vhbgroup.com/cardio/cardio_thrombosolv_preinform.htm#DESCRIPTION
http://www.clarislifesciences.com/product_monograph/1.asp?id=strikase
http://www.alibaba.com/catalog/10835599/INDIKINASE_R_streptokinase.html

 

[Thạch Thành Trung]

Nuôi cấy và thu nhận streptokinase:
Hầu hết những nghiên cứu gần đây các tác giả sử dụng những chủng thuộc loài S. equisimilis, điển hình là S.equisimilis H46A (ATCC12449). Chủng này được nuôi cây trên môi trường Brain infusion broth hay TSB (Trypticase Soy Broth) ở 37oC.
Sau thời nuôi cấy thích hợp có thể thu nhận chế phẩm enzyme streptokinase bằng cách tủa với muối amonium sulfat 45% bão hòa.
- Sau đó hòa tan trong đệm Tris-HCl 20mM, pH 6.0
- Thẩm tách ngược trong đệm để loại muối
- Tiếp theo ta có thể sử dụng chể phẩm cho những nghiên cứu bằng sắc kí hay điện di.
Tham khảo:
Elsa Pimienta & cs, (2007), Recombinant production of Streptococcus equisimilis streptokinase by Streptomyces lividans, Microbial Cell Factories.
Xu-Chu Wu, Ruiqiong Ye, Yanjun Duan, And Sui-Lam Wong, (1998), Engineering of Plasmin-Resistant Forms of Streptokinase and Their Production in Bacillus subtilis: Streptokinase with Longer Functional Half-Life, Environmental Microbiology Vol. 64, No. 3, p. 824–829

 

[Nguyễn Xuân Hưng]

Nuôi cấy và thu nhận streptokinase:
Hầu hết những nghiên cứu gần đây các tác giả sử dụng những chủng thuộc loài S. equisimilis, điển hình là S.equisimilis H46A (ATCC12449). Chủng này được nuôi cây trên môi trường Brain infusion broth hay TSB (Trypticase Soy Broth) ở 37oC.
Sau thời nuôi cấy thích hợp có thể thu nhận chế phẩm enzyme streptokinase bằng cách tủa với muối amonium sulfat 45% bão hòa.
- Sau đó hòa tan trong đệm Tris-HCl 20mM, pH 6.0
- Thẩm tách ngược trong đệm để loại muối
- Tiếp theo ta có thể sử dụng chể phẩm cho những nghiên cứu bằng sắc kí hay điện di.
Tham khảo:
Elsa Pimienta & cs, (2007), Recombinant production of Streptococcus equisimilis streptokinase by Streptomyces lividans, Microbial Cell Factories.
Xu-Chu Wu, Ruiqiong Ye, Yanjun Duan, And Sui-Lam Wong, (1998), Engineering of Plasmin-Resistant Forms of Streptokinase and Their Production in Bacillus subtilis: Streptokinase with Longer Functional Half-Life, Environmental Microbiology Vol. 64, No. 3, p. 824–829

Thường để viết 1 bài có tính chất review thế này nêncó một dàn ý nhất quán rồi triển khai ý theo đó. Ví dụ:

1. Giới thiệu chung

2. Nguồn thu nhận

3. Cấu trúc và hoạt tính

4. Ứng dụng

5. Sản xuất

6. Kết luận

 

[Thạch Thành Trung]

Em không định viết thành một bài đâu, vì tài liệu em thu thập đến thời điểm này còn khá hạn chế, chỉ là bước đầu mà thôi. Post bài chỉ mong sự trao đổi đánh giá, cũng như góp ý các thành viên thôi.
Em cũng tiếp thu ý kiến của anh cho các bài sau,...

 

[Nguyễn Xuân Hưng]

Em không định viết thành một bài đâu, vì tài liệu em thu thập đến thời điểm này còn khá hạn chế, chỉ là bước đầu mà thôi. Post bài chỉ mong sự trao đổi đánh giá, cũng như góp ý các thành viên thôi.
Em cũng tiếp thu ý kiến của anh cho các bài sau,...

Bài nào không lấy được bạn post sang box thích hợp, mọi người sẽ giúp.

 

[Thạch Thành Trung]

KHẢO SÁT HOẠT TÍNH STREPTOKINASE:
(1) Định tính bằng phương pháp đo vòng phân giải casein:
Nguyên tắc:
Hoạt tính streptokinase được định tính dựa vào việc xác định vòng phân giải casein của plasminogen được hoạt hóa trên môi trường thạch đĩa, tạo thành vòng sáng quanh khuẩn lạc.
Thực hiện:
 Môi trường gồm: 9ml Tris-HCl 50mM, pH 8.1/NaCl 150mM + 90mg agar + 100µg plasminogen người + 1ml sữa gầy.
 Cấy chủng Streptococcus spp. vào môi trường.
 Ủ 8-12h ở 37oC
 Xem vòng phân giải quanh khuẩn lạc

Horst Malke, và Joseph J.Ferretti, (1984), Streptokinase:Cloning, expression, and excretion by Escherichia coli, Microbiology, Vol.81, p 3557-3561.
(2) Định lượng hoạt tính streptokinase bằng phương pháp so màu:
Nguyên tắc: Hoạt tính streptokinase được định lượng bởi plasmin thủy giải cơ chất chromogenic peptidyl anilide (S-2251), và được phát hiện ở bước sóng 405nm.
Thực hiện:
Sau khi tham khảo một số bài báo thì có sự không thống nhất giữa các tác giả, cần phải tìm hiểu thêm,...Nếu bác nào có source hay hay, thì post bài nha.

 

[Nguyễn Xuân Hưng]

Sau khi tham khảo một số bài báo thì có sự không thống nhất giữa các tác giả, cần phải tìm hiểu thêm,...Nếu bác nào có source hay hay, thì post bài nha.

Đây là chuyện đương nhiên. Mỗi lab luôn có protocol riêng của lab đó, còn tùy thuộc vào điều kiện chủng vsv, hóa chất mà họ quen dùng, điều kiện thí nghiệm.....

Quan trọng là phương pháp đúng và kết quả cuối cùng thôi.

 

[Thạch Thành Trung]

Hic, quan trọng là em chưa tìm được cách định nghĩa đơn vị hoạt tính streptokinase tương ứng với từng protocol đó nên chưa có công thức tính,...

 

[Thạch Thành Trung]

Hiện tại có hai luồng thông tin trong giới y học là nên hay không nên sử dụng streptokinase như một tác nhân chống đông máu vì những tác dụng phụ của nó. Không biết các bác có thông tin chi tiết về việc này không?