sử dụng IMAGEJ phân tích băng protein (Western blot) kích thước không đồng đều

[le casper]

Hi ACE,

Trong phân tích kết quả Western blot, tôi sử dụng chương trình ImageJ (NIH). Thông thường, các băng protein có độ dài (thường chạy lane theo phương ngang) tương đương nên plot theo hướng dẫn là được. Tuy nhiên, với các băng protein có kích thước (độ dài của mỗi băng) không đều nhau, tôi k biết phải xử lý thế ra sao? Vì vậy, ACE nào có kinh nghiệm "xử lý", làm ơn chỉ dẫn được không ạ?

Xin cảm ơn!

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Nói chung bạn sẽ làm theo cách hiển nhiên nhất là làm box đủ rộng cho băng lớn nhất, và box phải có chiều cao đủ để chứa tất cả các băng protein cần so sánh nếu chúng có kích thước khác nhau. Box có chiều cao càng lớn thì peak của bạn càng sắc nét và việc định lượng sẽ chính xác hơn. Đồng thời việc chiều cao của box lớn sẽ giúp cho các trường hợp 1 box chồng lên 2 băng khác nhau. Lúc đó băng chính sẽ cho peak cao còn băng bị chồng sẽ cho peak nhỏ và bạn có thể dùng magic wand để lấy chính xác density của băng bạn cần.

Tuy nhiên có một lời khuyên nhỏ cho bạn là các reviewer luôn luôn sẽ đòi định lượng bằng ELISA trong trường hợp bài báo của bạn thuộc lĩnh vực protein expression.