sự tái bắt cặp không mong muốn của lai phân tử

[dinhxuanhuong00]

mong mọi người trả lời giúp:trong quá trình lai phân tử (cụ thể là phương pháp lai southern blot)thi co giai đoạn là làm biến tinh sợi đôi DNA kép thành sợi đơn rồi sau dods tiến hanh lai với probe,giả sử nhu sợi đơn DNA không bắt cặp với mẫu dò ma lai tái bắt cặp với sợi bổ sung ban đầu thì làm thế nào ?

 

[cfareast]

Buồn cười nhỉ? ADN tái bắt cặp, thì cũng phải để lại 1 chút bắt cặp với probe chứ...
Đùa thế thôi, số phân tử probe nhiều vô cùng, cho nên sẽ bắt cặp với trình tự bổ sung trên DNA bạn.

Dĩ nhiên sẽ có các variant DNA - DNA, Probe-Probe và DNA-probe.

Chỉ cần bắt cặp 1 ít là đủ hiện mầu.

Nguyên tắc cũng giống pcr vậy thôi.

 

[orion8x]

Sau khi biến tính DNA bằng pH thì có giai đoạn immobilize DNA trên màng mà, đâu phải làm trong dung dịch đâu mà tái bắt cặp!?

 

[dinhxuanhuong00]

hồi trước e có nghe cô nói là liên quan đến Tm của mẫu dò và DNA cần khuêch đại,nhưng không rõ lắm.có ai vấn đề này không?

 

[orion8x]

Mẫu dò - Khuếch đại!?? Bạn đang hỏi PCR hay southern blot dzậy!?
Tm (primer melting temperature) là nhiệt độ mà ở đó, 50% các cặp DNA sẽ tách rời thành DNA đơn (ssDNA). Do đó cần phải tính toán Tm của các primer để chọn nhiệt độ tối ưu cho phản ứng bắt cặp. Nhiệt độ quá cao primer kg bắt cặp đc, nhiệt độ quá thấp bắt cặp sẽ kg đặc hiệu (bắt cặp với đoạn DNA gần giống)

 

[dinhxuanhuong00]

hihi,e nhớ nhầm.a(c) có thể giải thich rõ cho e cái Tm nầy được ko ạ?

 

[orion8x]

Cơ bản có bao nhiu thì đã nói rồi đó! Bạn mún biết gì thêm nữa chứ!?

 

[hoang van duong1]

Theo mình thì trong Southern blot thì biến tính DNA trên gel (không phải trong dung dịch như PCR), sau đó chuyển DNA lên màng lai rồi cố định DNA trên màng bằng UV hay nhiệt nên khả năng tái bắt cặp rất thấp.

 

[dinhxuanhuong00]

ý của em là cách tính Tm của primer.