Trương Xuân Đại
Senior Member
Mặc dù nghe nói về ELISA đã nhiều nhưng mình chưa hiểu rõ về nó lắm.Có ai giúp mình với cảm ơn nhiều nhiều nha.Nếu có thêm phần ứng dụng và triển vọng để cùng bàn luận thì càng hay 
Tìm hiểu ELISA
- Thread starter Trương Xuân Đại
- Start date
http://en.wikipedia.org/wiki/ELISA
http://homepage.usask.ca/~vim458/virology/stud2005/diagnostics/elisa.html -> ứng dụng vào phát hiện virus.
http://homepage.usask.ca/~vim458/virology/stud2005/diagnostics/elisa.html -> ứng dụng vào phát hiện virus.
ELISA = Enzyme linked Immunosorbent Assay tự tên nó đã nói lên tất cả rồi.
Assay là phân tích, enzyme linked vì đánh dấu bằng enzyme, immuno vì có sử dụng kháng nguyên, sorbent là có khả năng tập hợp bằng hấp thụ (phụ).
Tóm lại nó là một phân tích sử dụng kháng thể để nhận diện protein (ta còn có Western blot nữa). Ở đây kháng thể ?đặc hiệu cho kháng nguyên (thường là protein ta quan tâm) ?được gắn vào đáy giếng. Chất mà ta quan tâm nằm trong mẫu thử được trộn lẫn với chất chuẩn có liên kết enzyme. Khi ta cho hỗn hợp này vào giếng thì giếng nào có chất của ta trong mẫu thử sẽ cạnh tranh với chất chuẩn làm cho giếng đó sau khi bắt màu sẽ nhạt hơn. So kết quả đó với một giếng chuẩn chỉ có chất chuẩn ta sẽ biết lượng chất ta quan tâm trong mẫu thử của ta là bao nhiêu.
ELISA được sử dụng nhiều trong y học, trong chẩn đoán (ví dụ có thai, ung thư...v.v), trong chẩn đoán bệnh cho gia súc vật. Có lẽ nó không có triển vọng nào nữa vì nó là một kỹ thuật khá lâu đời và đã được sử dụng hầu như thường ngày trong phòng thí nghiệm rồi.
Assay là phân tích, enzyme linked vì đánh dấu bằng enzyme, immuno vì có sử dụng kháng nguyên, sorbent là có khả năng tập hợp bằng hấp thụ (phụ).
Tóm lại nó là một phân tích sử dụng kháng thể để nhận diện protein (ta còn có Western blot nữa). Ở đây kháng thể ?đặc hiệu cho kháng nguyên (thường là protein ta quan tâm) ?được gắn vào đáy giếng. Chất mà ta quan tâm nằm trong mẫu thử được trộn lẫn với chất chuẩn có liên kết enzyme. Khi ta cho hỗn hợp này vào giếng thì giếng nào có chất của ta trong mẫu thử sẽ cạnh tranh với chất chuẩn làm cho giếng đó sau khi bắt màu sẽ nhạt hơn. So kết quả đó với một giếng chuẩn chỉ có chất chuẩn ta sẽ biết lượng chất ta quan tâm trong mẫu thử của ta là bao nhiêu.
ELISA được sử dụng nhiều trong y học, trong chẩn đoán (ví dụ có thai, ung thư...v.v), trong chẩn đoán bệnh cho gia súc vật. Có lẽ nó không có triển vọng nào nữa vì nó là một kỹ thuật khá lâu đời và đã được sử dụng hầu như thường ngày trong phòng thí nghiệm rồi.
Thạch Thành Trung
Senior Member
cho em bổ xung tí ha.
I/ Xét nghiệm ELISA:
ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay): hấp thụ miễm dịch liên kết với enzyme.
Có hai phương pháp xét nghiệm ELISA:
1. Phương pháp ELISA trực tiếp( direct ELISA): dùng để phát hiện kháng nguyên trong mẫu xét nghiệm.
2. Phương pháp ELISA gián tiếp(indirect ELISA): dùng để phát hiện kháng thể chuyên biệt trong huyết thanh.
VD: xét nghiệm HIV sử dụng phương pháp ELISA gián tiếp nhằm phát hiện kháng thể kháng virut HIV .
Sự liên kết giữa KN_KT được phát hịên bằng cách thêm cơ chẩt của một phản ứng tạo màu được xúc tác bởi enzyme.Enzyme thường dùng để đánh dấu là : peroxidase, beta_galactoxidase, alkaline phosphatase,...
II/ Thao tác:
Thao tác làm xét nghịêm ELISA của hai phương pháp cơ bản giống nhau.(xem hình)
? dỉect ELISA
Mẫu dương tính là có sự hiện diện của KN hay KT trong mẫu đựơc giữ laị trên khay xét nghiệm và cho phản ứng tạo màu khi thêm cơ chất.
III/ Khả năng ứng dụng của ELISA:
?Ưu điểm quan trọng nhất của phương pháp ELISA là độ nhạy cao, có thể phát hiện được phức hợp nhỏ KN_KT, cho phép phát hiện sớm tác nhân gây bệnh ở giai đoạn sớm khi mầm bệnh mới xâm nhiễm.
? Dùng để phát hịên nhiều loại Protein, nhận diện virut, vikhuẩn, và một số hợp chất phân tử lượng nhỏ trong nhiều mẫu sinh học khác nhau.
I/ Xét nghiệm ELISA:
ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay): hấp thụ miễm dịch liên kết với enzyme.
Có hai phương pháp xét nghiệm ELISA:
1. Phương pháp ELISA trực tiếp( direct ELISA): dùng để phát hiện kháng nguyên trong mẫu xét nghiệm.
2. Phương pháp ELISA gián tiếp(indirect ELISA): dùng để phát hiện kháng thể chuyên biệt trong huyết thanh.
VD: xét nghiệm HIV sử dụng phương pháp ELISA gián tiếp nhằm phát hiện kháng thể kháng virut HIV .
Sự liên kết giữa KN_KT được phát hịên bằng cách thêm cơ chẩt của một phản ứng tạo màu được xúc tác bởi enzyme.Enzyme thường dùng để đánh dấu là : peroxidase, beta_galactoxidase, alkaline phosphatase,...
II/ Thao tác:
Thao tác làm xét nghịêm ELISA của hai phương pháp cơ bản giống nhau.(xem hình)
? dỉect ELISA
Mẫu dương tính là có sự hiện diện của KN hay KT trong mẫu đựơc giữ laị trên khay xét nghiệm và cho phản ứng tạo màu khi thêm cơ chất.
III/ Khả năng ứng dụng của ELISA:
?Ưu điểm quan trọng nhất của phương pháp ELISA là độ nhạy cao, có thể phát hiện được phức hợp nhỏ KN_KT, cho phép phát hiện sớm tác nhân gây bệnh ở giai đoạn sớm khi mầm bệnh mới xâm nhiễm.
? Dùng để phát hịên nhiều loại Protein, nhận diện virut, vikhuẩn, và một số hợp chất phân tử lượng nhỏ trong nhiều mẫu sinh học khác nhau.
Tìm hiểu phương pháp kiểm elisa
Mình đang sử dụng phương pháp kiểm elisa trong kiểm chloramphenicol của hãng TAIWAN ADVANCE BIO-PHARMACEUTICAL INC. Mình có nhiều điều chưa hiểu như:
-Có phải phản ứng theo kiểu sandwich: kháng thể( trong well)-kháng nguyên(trong mẫu,nếu có)- kháng thể(enzime) hay không?
-Công dụng của Etyl acetate, n-Hexan, Đệm CAP,enzime, substrate solution,stop solution?
-Sau khi rửa thì trong well còn lại những gì, nếu rửa không sạch thì kết quả sẽ như thế nào?
-Nếu chỗ kết quả Concentration là 0.011;0.023;0.06... thì nguyên nhân nào dẫn đến sự khác nhau đó? Vậy trong mẫu của mình có chloramphenicol không?
-Theo mình hiểu phương pháp xác định có chloramphenicol theo cường độ màu, vậy thì không có chloramphenicol mà vẫn có biến đổi màu xanh là do đâu?
Nếu có thể,xin nói rõ luôn về cơ chế phản ứng của mẫu-ezime-kháng thể trong well.Cám ơn!!!
Mình đang sử dụng phương pháp kiểm elisa trong kiểm chloramphenicol của hãng TAIWAN ADVANCE BIO-PHARMACEUTICAL INC. Mình có nhiều điều chưa hiểu như:
-Có phải phản ứng theo kiểu sandwich: kháng thể( trong well)-kháng nguyên(trong mẫu,nếu có)- kháng thể(enzime) hay không?
-Công dụng của Etyl acetate, n-Hexan, Đệm CAP,enzime, substrate solution,stop solution?
-Sau khi rửa thì trong well còn lại những gì, nếu rửa không sạch thì kết quả sẽ như thế nào?
-Nếu chỗ kết quả Concentration là 0.011;0.023;0.06... thì nguyên nhân nào dẫn đến sự khác nhau đó? Vậy trong mẫu của mình có chloramphenicol không?
-Theo mình hiểu phương pháp xác định có chloramphenicol theo cường độ màu, vậy thì không có chloramphenicol mà vẫn có biến đổi màu xanh là do đâu?
Nếu có thể,xin nói rõ luôn về cơ chế phản ứng của mẫu-ezime-kháng thể trong well.Cám ơn!!!
Mình cũng đang có kế hoạch làm thí nghiêm mà liên quan tới elisa. Bạn nào đã làm rồi thì cho mình hỏi về các plate với (nó có hóa chất sẵn trong giếng hay không?, các khay đó có thể tái sử dụng không?), vì mình đang phải cố định 1 antigen mới mà (không có bài báo đã làm trc rồi), đọc trong quyển "the elisa guidebook" thấy nó nói chung nên chưa có kinh nghiệm vận dụng, mà hóa chất thiết bị có hạn. Mong được mọi người giúp đỡ
nguyenbatho
Junior Member
Nếu bạn cần thì liên lạc với mình daocnh26@yahoo.com. Mình sẽ giải đáp cho bạn
Similar threads
