Search results

Tình hình là em đã tách được như hình em post ở đây. Số mẫu này được chia làm 2 nhóm, mỗi nhóm 4 mẫu: Những lane cùng số là cùng 1 mẫu. Nhóm bên trái khoảng 300 mg/mẫu, nhóm bên phải khoảng 150mg/mẫu. Em nghĩ là mẫu bị smear ít thế này là ổn. Nhưng anh tutor bảo là chưa đủ OK để chạy...

Vâng, cảm ơn bác đã chỉ giáo: Em đã dùng EP tube và cũng dùng pipette loại 1ml. Em đã xử lý theo các gợi ý của các anh em trong diễn đàn này và pha lại dung dịch proteinase K (em nghĩ các aliquot cũ bị hỏng), ủ ở 56 độ C, 1h. Sau đó ủ RNase 37oC, 1h. Và tiến hành loại protein chỉ đúng 3 lần...

. Mình đọc đi đọc lại mà chả hiểu chủ thớt hỏi gì :sexy:

Tách DNA xong, mình sẽ dùng để chạy PCR và digest bằng restriction enzymes.

Hồi trước mình có làm ủ riêng proteinase K ở 56 độ C overnight. Nhưng ở lab này mình đã thử ủ cả RNase và proteinase K ở 37oC thì kết quả vẫn có lúc OK. Dù sao mình cũng sẽ thử ủ proteinase K ở 56oC xem sao. Thank bạn

Đúng là mình hút không nhẹ lắm => Cái này sẽ rút kinh nghiệm. Nhưng loại protein ít lần thì bề mặt giữa 2 lớp hỗn hợp vẫn còn tủa protein màu trắng rất nhiều. Nên mình ko thể làm sạch được protein nếu hút dưới 10 lần. Theo bạn, lớp tủa trắng đó vẫn còn thì có được không?

Em chào các anh chị, Tình hình là không hiểu sao dạo gần đây em tách DNA từ nấm Mucor gặp phải hiện tượng mẫu DNA bị smear gần như hoàn toàn (xem hình). Đáng chú ý là thỉnh thoảng có mẫu thu được lại rất đẹp, nhưng phần lớn là bị smear. Em đã thay đệm lysis buffer mới nhưng vẫn không ăn...

Kinh nghiệm thì làm sao mà em có được khi em mới chập chững được 2 tháng làm thí nghiệm??? Mà nếu có kinh nghiệm rồi thì khó có thể mắc lỗi đến mức cần hỏi các bác. Vì thế tận dụng kinh nghiệm của các cao nhân đi trước mới cần thiết chứ!!! Em đã chứng minh được trong mẫu còn tồn dư DNase và đã...

Sở dĩ em chọn Bgl2 vì nó chỉ cho 1 băng duy nhất nên đỡ mất công tính toán, chứ em cũng ko quan tâm đến nó đắt hay rẻ (vì được bao cấp mà :mrgreen:). Em đã nghiên cứu lại và tìm ra nguyên nhân của việc mẫu bị smear hoàn toàn là do trong mẫu vẫn còn dư DNase. Do đó, em đã loại bỏ nó bằng phenol...

Em cũng đang định thử cắt 2h thôi để xem thế nào, liệu có khi nào cắt over night có dẫn đến hiện tượng này ko nhỉ?

Chắc chắn là sau khi tách chiết và điện di plasmid để chọn lọc những plasmid khả dĩ, rồi sau đó em mới mang đi cắt chứ bác. Nên chắc chắn là trong mẫu có plasmid. Em thấy lạ là hiện tượng này xẩy ra khá nhiều lần với các đoạn insert và các enzyme khác nhau. Chỉ có 1 số lần là em cắt ra các...

Kính chào các anh chị em Em đang cắt kiểm tra các plasmid có mang insert hay không nên em đã lựa chọn Bgl2 là enzyme chỉ có 1 điểm cắt duy nhất trong insert mà không cắt vector. Về mặt lý thuyết nó sẽ tạo ra 1 băng có kích thước khoảng 9kb. Tuy nhiên, sau khi ủ ở 37 độ C, qua đêm thì kết quả...

Theo kinh nghiệm của mình thì nếu bạn chạy PCR sử dụng DNA template là plasmid thì có thể tạo ra 3 vạch, trong đó 1 vạch đậm là sản phẩm PCR; còn 2 vạch mờ là có thể là do plasmid còn dư (nếu nồng độ plasmid quá cao) hoặc bị lẫn genomic DNA trong mẫu plasmid.

Yeah! Anh đang làm PhD chuyên ngành Sinh học phân tử bên TBN. Em đang đi học hay làm ở đâu? Chuyên ngành gì? Có gì chia sẻ thông tin nhé!

Lời khuyên cho em: Học hành chăm chỉ, đọc nhiều sách, ghi chép cẩn thận và nhất là phải yêu thích môn học. "Có công mài sắt, có ngày nên xà beng" :mrgreen: Good luck!

Thân gửi các anh chị em, Trong quá trình làm thí nghiệm cloning, em hay phải dùng nhiều loại enzyme giới hạn khác nhau. Trong đó có 1 số loại như BamH1, Bgl2... theo như NEB thì chúng No heat inactivation. Do đó, trước khi ligation em cứ phải purify trên gel rất mất việc mà có khi làm hỏng mất...

Bạn dùng DNA template là gì? genomic DNA hay plasmid?

Em đã hỏi mấy đứa bạn trong lab và xem trên các trang thông tin khác, và phát hiện ra 1 nguyên nhân quan trọng: có thể trong quá trình purify vector và insert đã làm mất các đầu dính, do tác động của tia UV và quá trình purify. Vì thế em quyết định chơi "quick and dirty" => kết quả thật mỹ mãn...

Bác chia đôi lượng ligation như thế liệu có làm giảm số thể biến nạp thu được? Bác biến nạp 2-5ul cho 100 hay 200 ul competent cell? Em biến nạp cả 10ul ligation cho 200 ul cell. Em đã PCR lại cả 2 đoạn insert và thu được 1 lượng khá lớn, đồng thời cũng digestion 1 đoạn insert khác đã gắn vào...

Cảm ơn bác đã chia sẻ. Em nghĩ là competent cell chắc là vẫn ổn, vì trước đó em TA clone 1 đoạn khác cũng dài 3kb vào pGEMT lên ngon lành. Em đang dùng pGEMT do mọi người trong lab chia sẵn thành các tube, mỗi tube đựng đúng 1ul nên ko rõ tỷ lệ pha loãng thế nào. Đúng như bác nói, em cũng...