What's new

Phân tách protein từ hỗn hợp sau khi phá vỡ tế bào?

#1
sau khi phá vỡ tế bào thì trong hỗn hợp thu được có protein,DNA,ARN,mảnh vỡ tế bào,các bào quan,và enzyem trong đó cần bất hoạt protease,
anh chị cho em hỏi lám sao để bất hoạt protease,nếu như kết tủa nó thì protein củng kết tủa,vậy làm thế nào để thu được protein??
nếu sử dung rượu có nồng độ 70% để laoij protease thf protein cần thu có ảnh hưởng gì không?/
ạnh chị nào chỉ giúp em với.:hoanho:
 

cuncon

New member
sau khi phá vỡ tế bào thì trong hỗn hợp thu được có protein,DNA,ARN,mảnh vỡ tế bào,các bào quan,và enzyem trong đó cần bất hoạt protease,
anh chị cho em hỏi lám sao để bất hoạt protease,nếu như kết tủa nó thì protein củng kết tủa,vậy làm thế nào để thu được protein??
nếu sử dung rượu có nồng độ 70% để laoij protease thf protein cần thu có ảnh hưởng gì không?/
ạnh chị nào chỉ giúp em với.:hoanho:
Khi pha vo te bao thi duoc dich chiet tong so, protein chu yeu nam o TBC, con ARN va ADN nam o nhan nen khong giai phog hoan toan dau,ly tam ban loai duoc it roi. Hinh nhu ban phai tinh sach protein bang nhieu phuong phap chu. Phuong phap nao thi tuy protein cua ban co dac tinh gi, thong thuong dung cac loai sac ki, de han che protease thi co bo sung cac chat uc che, cu the
.Với Protease serine dùng chất ức chế Phenyle methyl sunphonyl fluoride (PMFS), CM = 0,1 -1 mM.
.Với Protease cystein, chất ức chế Idoacetic acid hay idpacetate, CM = 10 – 100 mM.
.Với Protease chứa kim loại thì dung EDTA,CM =1-2mM
.Với một số Protease acid dùng pepstatin A, CM = 1mM.
 

danhngoc

New member
Dĩ nhiên là trong dịch trích thô ban đầu sẽ có nhiều thành phần. Bạn phải ly tâm với số vòng thích hợp thì mới tách ra khỏi dịch trích thô ban đầu đó hỗn hợp có chứa 2 thành phần là protein và protease, sau đó tùy điều kiện bạn có thể sử dụng một trong các pp sau:
pp sac ky: để tách protein và protease ra khỏi nhau, nhưng bạn phải biết được đặc tính và trọng lượng phân tử của 2 thằng này (trong đó thằng protease cũng có nhiều loại nữa, mỗi loại có trọng lượng cũng khác nhau luôn) để chọn loại gel cho thích hợp (nếu dùng sắc ký lọc gel), các loại gel này có bán rất nhiều.
dùng tác nhân gây bất hoạt protease: tùy loại protease là gì có thể sử dụng các tác nhân như cuncon đã hướng dẫn, hoặc sử dụng các loại muối cũng được (nếu bạn muốn giảm chi phí)
 

nehigoha

Member
Thông thường người ta cho protease inhibitor cocktail (PMSF, DTT...) vào khi bắt đầu lyse tế bào. Protease inhibitors cũng như protease sẽ được loại ra khỏi sample trong quá trình purifying proteins, i.e. chromatography.
 
Dĩ nhiên là trong dịch trích thô ban đầu sẽ có nhiều thành phần. Bạn phải ly tâm với số vòng thích hợp thì mới tách ra khỏi dịch trích thô ban đầu đó hỗn hợp có chứa 2 thành phần là protein và protease, sau đó tùy điều kiện bạn có thể sử dụng một trong các pp sau:
pp sac ky: để tách protein và protease ra khỏi nhau, nhưng bạn phải biết được đặc tính và trọng lượng phân tử của 2 thằng này (trong đó thằng protease cũng có nhiều loại nữa, mỗi loại có trọng lượng cũng khác nhau luôn) để chọn loại gel cho thích hợp (nếu dùng sắc ký lọc gel), các loại gel này có bán rất nhiều.
dùng tác nhân gây bất hoạt protease: tùy loại protease là gì có thể sử dụng các tác nhân như cuncon đã hướng dẫn, hoặc sử dụng các loại muối cũng được (nếu bạn muốn giảm chi phí)
Protein khác với protease ở điểm gì ? ANh làm ơn cho em biết với
 
Dĩ nhiên là trong dịch trích thô ban đầu sẽ có nhiều thành phần. Bạn phải ly tâm với số vòng thích hợp thì mới tách ra khỏi dịch trích thô ban đầu đó hỗn hợp có chứa 2 thành phần là protein và protease, sau đó tùy điều kiện bạn có thể sử dụng một trong các pp sau:
pp sac ky: để tách protein và protease ra khỏi nhau, nhưng bạn phải biết được đặc tính và trọng lượng phân tử của 2 thằng này (trong đó thằng protease cũng có nhiều loại nữa, mỗi loại có trọng lượng cũng khác nhau luôn) để chọn loại gel cho thích hợp (nếu dùng sắc ký lọc gel), các loại gel này có bán rất nhiều.
dùng tác nhân gây bất hoạt protease: tùy loại protease là gì có thể sử dụng các tác nhân như cuncon đã hướng dẫn, hoặc sử dụng các loại muối cũng được (nếu bạn muốn giảm chi phí)
Nếu em có thể ngồi trong hội đồng chấm luận án , em sẽ đánh trượt anh ngay lập tức. Anh cần đọc rất rất nhiều...
 

Facebook

Top