Các phương pháp loại lipid và tinh bột ra khỏi mẫu protein?

[Nguyễn Ngọc Lương]

Các phương pháp loại lipid và tinh bột ra khỏi m?

Khi chúng ta tách chiết protein dự trữ thông thường chúng ta phải tiến hành thêm các bước loại lipid và tinh bột ra khỏi mẫu để tránh cản trở quá trình phân tích protein.
Các phương pháp loại lipid mà tôi đã biết:
phenol/ether
petroleum ether
kết tủa protein bằng TCA/acetone
loại tinh bột:
đun nóng
Trong mấy phương pháp trên tôi mới thử kết tủa bằng TCA/acetone. Phương pháp phenol/ether được nêu trong một bài báo trong hóa phân tích và tôi cũng biết sơ qua. Tuy nhiên phương pháp petroleum ether không tìm thấy ở một bài báo ngoại quốc nào mà chỉ có ở một bài báo VN xuất bản 1996 do Lê Thị Muội chủ trì. Có bạn nào biết quy trình làm của nó không?
Khi kết tủa bằng acetone thì có cần loại tinh bột không?
Có phương pháp loại lipd nào không làm biến tính protein không?
Cuối cùng tôi tự hỏi thậm chí nếu đã dùng đệm chiết có độ ion mạnh hoặc nước cất thì lipid có hòa tan trong đấy đâu mà phải loại nhỉ? Các bạn giúp với.

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Có bài báo này nhờ bạn nào hảo tâm lấy giúp với:
Mastro R, Hall M. Protein delipidation and precipitation by tri-n-butylphosphate, acetone, and methanol treatment for isoelectric focusing and two-dimensional gel electrophoresis. Anal Biochem. 1999 Sep 10;273(2):313-5.
cám ơn trước.

 

[quataovang08]

Hỏi kinh nghiệm loại tạp

Em chào anh!
Hiện em đang làm thí nghiệm về protein, cụ thể là enzyme, cũng băn khoăn rất nhiều về việc loại tạp lipid và tinh bột. Liệu anh có thể chỉ cho em vài kinh nghiệm được không ạ?
Em cảm ơn anh nhiều!

 

[huynhthanh2010]

Sao bạn không lấy đi ly tâm , lúc đó Lipid sẽ là một lớp màng mỏng ở phía trên, làm thế không làm cho Protein bị biến tính.Sau đó cho dung dịch đệm vào , tiếp tục đem li tâm, bỏ đi lớp trên, sẽ được Protein kết tủa......

 

[Mitita]

Anh Lương ơi cho em hỏi: khi anh tủa bằng TCA/Acetone, ở bước cuối anh dùng gì để hòa tan tủa protein. Em muốn xác định nồng độ nó nữa nên chắc ko dùng SDS được. Mà dùng PBS thì nó ko tan, vì em đã lỡ đun lên 95 độ C cho bay hơi hết acetone nên Protein biến tính hết rồi (em nghĩ thế).
Anh có đề xuất gì ko ạ.
Cảm ơn anh!

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Tủa xong thì bạn ly tâm 13000 vòng/15 phút, đổ dịch nổi thu tủa, rồi để ở nhiệt độ phòng khỏang 15-20 phut cho bay hơi đi rồi hòa tan vào bất cứ đệm gì bạn thích. Cho đệm vào bạn để mẫu vào đá khoảng 15-20 phút cho nó tự tan.
Protein tủa bằng acetone vẫn có thể bị biến tính rồi, dù là acetone -20C, nên bạn có đun sôi hay làm gì nữa thì cũng thế mà thôi. Muốn tủa protein không biến tính thì chỉ có Ammonium Sulfate trong đk lạnh.