Media trong nuôi cấy tế bào da

[Autumn Luna]

Em là newbee trong lĩnh vực này nên muốn hỏi các bác mấy câu hỏi:

* Hiện tại em cần thử nghiệm nuôi cấy MSC từ mô tế bào da của bệnh nhân, mà em lại có 3 loại media như sau:
1. DMEM/Ham’s F-12 liquid With L-Glutamine
2. DMEM (4,5g/l) liquid With Sodium Pyruvate With L-Glutamine
3. DMEM (4,5g/l) liquid With L-Glutamine
Vậy thì trong trường hợp này nên dùng loại nào ạ?


* Vai trò của QUANTUM 333? Trong trường hợp này có cần dùng k ạ?


* FBS, Newborn Calf Serum, Calf Serum hay Bovine Serum?


* Hồi sinh viên thì em dùng Penecillin + Streptomycin, thế nhưng hiện tại em có 1 chai: Antibiotic-Antimycotic Solution, vậy thì cũng có thể dùng tương tự đc ạ?


* Sau khi thu được quần thể tế bào mới, em cần test xem nó có phải là tbg k, thì ngoài hình thái + khả năng biệt hóa, thì còn cách nào có thể check đc k ạ?
Em biết thêm phương pháp FACS, thế nhưng lại k biết là sử dụng Fluorescent dye nào để nhuộm markers đặc hiệu của tbg?
Tại phần này em mới đọc lý thuyết, chưa làm bao giờ nên còn rất bỡ ngỡ.
Mong mọi người giúp đỡ ạ!
Thanks!

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Lâu ngày tay nghề rusty rồi không nhớ nhiều lắm nữa, thử trả lời bạn dựa trên trí nhớ lõm bõm:
+ môi trường giàu thì tế bào kém biệt hóa, môi trường nghèo thì kích thích tế bào biệt hóa. Vậy có lẽ bạn nên xài F-12 để tăng sinh.
+ bạn xài horse hoặc bovine serum là đủ rồi. FBS mắc tiền không cần thiết.
+ cách xác nhận là tế bào gì, ở VN chủ yếu là nhuộm bằng thuốc nhuộm đặc trưng thôi, làm gì mà FACS ghê gớm thế. Hoặc nhuộm hóa miễn dịch với các marker bề mặt đặc hiệu.

 

[Autumn Luna]

Thnk bạn nhìu! Thế cho mình hỏi với, thuốc nhuộm đặc trưng cho tbg loại này thì mình dùng j bạn nhỉ? Tại mình bị "giao khoán" cái phần này, mà tìm mãi k ra

 

[Nguyễn Duy Hưng]

Epithelial cells thì cần phải có scaffold để tạo độ bám cho nó nữa.

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

à, bạn biệt hóa thành keratinocytes (tế bào sừng) phải không?
Tôi không rành lắm về thuốc nhuộm. Bạn có thể hỏi chi tiết kỹ thuật ở PTN của thầy Phan Kim Ngọc ở Đại học KHTN Đại học QG tp HCM.

 

[Autumn Luna]

@ Hưng: bạn có thể giải thích thêm cho mình về scaffold được k?
@ Lương: mình chưa muốn biệt hóa, mà chỉ muốn làm sao để chứng minh được cái mình nuôi ra là tbg thôi Bởi vì nếu chỉ xác định bằng hình thái thì k chính xác lắm.
Có thấy cả phương pháp nhuộm bằng alkaline phosphatase nhưng chưa tìm đc protocol. Nếu các bạn biết thì giúp mình với!

 

[Nguyễn Duy Hưng]

Với tế bào da, nó đòi adhesion, nôm na là sự kéo dãn, tế bào banh ra thì mới biệt hóa tốt đc. Thường cấu trúc của da có các nhóm collagen tạo nên sự kéo dãn này (bằng cách liên kết với các thành phần trên bề mặt tế bào).
Vì vậy nuôi cấu da in vitro thường phải cho nó 1 cái extra cellular matrix (chính là cái scaffold). Cấu trúc đơn giản nhất chính là collagen, phức tạp hơn thì collagen cố định các gốc liên kết, tăng cường cell adhesion. Phức tạp nhất là tích hợp cả các hormone tăng trưởng vào scaffold như epithelial growth factor.
Hiện nay trong tissue engineering và would healing người ta đang tập trung hoàn thiện cấu trúc scaffold, khi bị thương chỉ cần cấy scaffold này vào để tế bào gốc của ng đc ghép tự phát triển.
Nếu làm ra 1 cái scaffold có sẵn tế bào gốc ở trong thì sẽ phức tạp hơn về mặt regulation và approval. Nhiều nước ko cho lưu hành sản phẩm chứa tế bào gốc, nước cho lưu hành thì kiểm soát rất nghiêm ngặt để phòng ngừa pathogen.

AlloDerm của Lifecell là 1 ví dụ của sp scaffold không có tế bào bên trong

Còn cái Epicel của Genzyme thì là Scaffold có tế bào bên trong