Biểu hiện ở E.coli

[Cao Xuân Hiếu]

Đâu, đc Hiếu đọc nhầm đấy chứ. Cái đó là nói đến kinh nghiệm biểu hiện từ trước đến giờ. 2 cái giếng bên phải là của 1 construct có stop codon TAG, 4 cái giếng bên trái là của 1 construct có cùng số a.a nhưng stop codon là TGA.
Ví dụ nhiều người nói ở Saccharomyces s. có hiện tượng overglycosylation nhưng thực tế mấy cái antigen mình biểu hiện ở nấm men đều có kích thước đúng với computed MW (không tính glycosylation). Chỉ có 1 trường hợp duy nhất thì kích thước có vẻ thấp hơn khoảng 1-2kDal (thay vì cao hơn nếu thực sự glycosylation)

Cái trường hợp mọc chậm cũng rất lạ. Hôm qua inoculate 2 thằng constructs để seed overnight, thì 1 thằng đã đục ngầu sau 14 tiếng còn thằng kia vẫn trong veo. Bực quá inoculate lại thằng kia thì sau 3 tiếng đã đục ngầu.
Trường hợp leakage do plasmid thì chắc là không có vì induced với non-induced thấy khác rõ. Với lại cái grow pattern cũng không consistent trong cùng 1 colony. Hôm nay thế kia mai thế khác. Có lẽ do thằng BL21 này xài nhiều loại kháng sinh quá chắc.

cái stop codon đấy bị "read through" rồi. Cách nhanh nhất là cắt đoạn gel đấy đi kiểm tra bằng MALDI-MS xem có phải là sản phẩm của mình không là khẳng định được.

Cái leakage thì nó làm tổng hợp 1 lượng rất nhỏ protein tái tổ hợp trong điều kiện non-induced. Nếu mà detect bằng Coomassive thì khó xác định nhưng nếu protein đó gây độc tế bào thì sẽ làm giảm tốc độ sinh trưởng của dòng. Việc kiểm tra có leakage hay không thì thường phải dùng complementation assay.