Bạn nào có kinh nghiệm phong phú chia xẻ giúp với nhé.
Mình đang làm trên đối tượng Genomic DNA (sẽ dùng gradient Tm) và fosmid library batch segregation plasmid mix (dĩa 96 giếng).
Có đọc sơ về degenerate primers. Rất tiếc primers do người đi trước thiết kế rồi giờ mình chỉ thừa kế thôi nên skip công đoạn thiết kế.
Mình muốn tham khảo đk chạy. Với genomic DNA thì có nhiều sách viết rồi. Với hỗn hợp batch plasmid (trộn từ 96 colony từ fosmid library) mình cũng tính làm thử vài Tm, nhưng không biết như thế nào thì gọi là 'exhaust the cases', tức là không ra band là vứt batch đó luôn. Step khoảng 2oC thì có ổn không? Theo sách nhiệt độ đem thử là khoảng 55-65. Nhưng cái degenerate primers của mình khoảng 14 Nu, và đầu 3' lại có ambiguous Nu. Và 1 đứa trong lab câu ra được gene thì nó dùng Tm 47 độ.
Cám ơn trước!
Mình đang làm trên đối tượng Genomic DNA (sẽ dùng gradient Tm) và fosmid library batch segregation plasmid mix (dĩa 96 giếng).
Có đọc sơ về degenerate primers. Rất tiếc primers do người đi trước thiết kế rồi giờ mình chỉ thừa kế thôi nên skip công đoạn thiết kế.
Mình muốn tham khảo đk chạy. Với genomic DNA thì có nhiều sách viết rồi. Với hỗn hợp batch plasmid (trộn từ 96 colony từ fosmid library) mình cũng tính làm thử vài Tm, nhưng không biết như thế nào thì gọi là 'exhaust the cases', tức là không ra band là vứt batch đó luôn. Step khoảng 2oC thì có ổn không? Theo sách nhiệt độ đem thử là khoảng 55-65. Nhưng cái degenerate primers của mình khoảng 14 Nu, và đầu 3' lại có ambiguous Nu. Và 1 đứa trong lab câu ra được gene thì nó dùng Tm 47 độ.
Cám ơn trước!
