Tách ADN Cây lát hoa!

[leduchuankhtn]

Mình đã tách AND từ lá cây lát hoa (gỗ lát hoa) bằng quy trình tách chung và quy trình tách cây thân gỗ mấy lần nhưng không ra! Có ai có quy trình tách của cây này hay hiểu về việc tách ADN của cây này xin tư vấn cho mình! Thanks
(Mail của mình làL: leduchuankhtn@gmail.com)
2 Quy trình mình làm là:
* Quy trình 1:
- Lấy 200g lá nghiền trong nitơ lỏng thành bột mịn.
- Bổ sung 0,8ml đệm rửa, ly tâm 15p tốc độ 1200v/phút, loại bỏ dịch nổi. Bước này làm 2 lần.
- Thêm 0,7ml đệm tách, mix nhẹ. Ủ 65 độ ít nhất 1h, 5p lắc 1 lần, lấy ra để nhiệt độ phòng 5p.
- Thêm 0,6 ml chloroform: isoamyl(24:1) trộn đều 20p(dung máy trộn càng tốt).
- Li tâm 13000v/p trong vòng 10p.
- Hút 0.5 ml dịch sang ống 1,5ml, bỏ tủa.
- Thêm 0,5 ml isopropanol, mix nhẹ đặt lên đá (để tủ lạnh qua đêm) chờ có tủa trắng.
- Ly tâm 13000v/p trong vòng 5p. bỏ dịch úp xuống giấy cho khô.
- Bổ xung 0,3 ml cồn 70% búng nhẹ.
- Li tâm 13000v/p trong vòng 5p. loại bỏ cồn(Làm 2 lần)
- Làm khô DNA bang máy speed vac hoặc để trong box bật quạt.
- Hòa tan DNA trong 0,2ml nước khử ion.
* Quy trình 2:
- Nghiền 200g lá trong ni tơ lỏng
- Thêm 0,7ml dung dịch đệm chiết đảo nhẹ.
- Ủ 65 độC trong 1h, 5p đảo 1 lần.
- Thêm 0,6 ml chloroform: isoamyl(24:1) trộn đều 20p(dung máy trộn càng tốt).
- Li tâm 13000v/p trong vòng 10p.
- Hút 0.5 ml dịch sang ống 1,5ml, bỏ tủa ử trong đá 1h.
- Thêm 0,5 ml isopropanol, ủ trong đá 15p-1h
- Li tâm 10p 1300v/p thu tủa, rủa tủa bằng cồn 70 độC, li tâm thu tủa.
- Làm khô AND sau đó thêm 0,05 ml nươc khử ion.

 

[Dương Văn Cường]

Mình đã tách AND từ lá cây lát hoa (gỗ lát hoa) bằng quy trình tách chung và quy trình tách cây thân gỗ mấy lần nhưng không ra! Có ai có quy trình tách của cây này hay hiểu về việc tách ADN của cây này xin tư vấn cho mình! Thanks

Chung ở mức độ nào? Ở lab bạn hay ở trường bạn hay ở VN hay toàn thế giới?

Bạn nên post chi tiết 2 protocol đó lên thì người ta mới có manh mối để giúp, hoặc chí ít cũng làm ơn cho xin cái tên khoa học của loài đó. Đọc qua mình lại tưởng bạn lấy gạch lát nền làm mẫu để tách chiết DNA.

 

[voh5]

Ông Cường càng ngày càng hay bắt bẻ anh em bạn bè rồi! Nhưng mà công nhận đúng là phải cho anh em bà con biết protocol ntn để còn ... tách hộ chứ.
Mình thì định chào ngay cái kit DNA Plant Mini Kit của bọn Qiagen, có khi tách được đấy, mà đơn giản

 

[leduchuankhtn]

2 Quy trình mình làm là

* Quy trình 1:
- Lấy 200g lá nghiền trong nitơ lỏng thành bột mịn.
- Bổ sung 0,8ml đệm rửa, ly tâm 15p tốc độ 1200v/phút, loại bỏ dịch nổi. Bước này làm 2 lần.
- Thêm 0,7ml đệm tách, mix nhẹ. Ủ 65 độ ít nhất 1h, 5p lắc 1 lần, lấy ra để nhiệt độ phòng 5p.
- Thêm 0,6 ml chloroform: isoamyl(24:1) trộn đều 20p(dung máy trộn càng tốt).
- Li tâm 13000v/p trong vòng 10p.
- Hút 0.5 ml dịch sang ống 1,5ml, bỏ tủa.
- Thêm 0,5 ml isopropanol, mix nhẹ đặt lên đá (để tủ lạnh qua đêm) chờ có tủa trắng.
- Ly tâm 13000v/p trong vòng 5p. bỏ dịch úp xuống giấy cho khô.
- Bổ xung 0,3 ml cồn 70% búng nhẹ.
- Li tâm 13000v/p trong vòng 5p. loại bỏ cồn(Làm 2 lần)
- Làm khô DNA bang máy speed vac hoặc để trong box bật quạt.
- Hòa tan DNA trong 0,2ml nước khử ion.
* Quy trình 2:
- Nghiền 200g lá trong ni tơ lỏng
- Thêm 0,7ml dung dịch đệm chiết đảo nhẹ.
- Ủ 65 độC trong 1h, 5p đảo 1 lần.
- Thêm 0,6 ml chloroform: isoamyl(24:1) trộn đều 20p(dung máy trộn càng tốt).
- Li tâm 13000v/p trong vòng 10p.
- Hút 0.5 ml dịch sang ống 1,5ml, bỏ tủa ử trong đá 1h.
- Thêm 0,5 ml isopropanol, ủ trong đá 15p-1h
- Li tâm 10p 1300v/p thu tủa, rủa tủa bằng cồn 70 độC, li tâm thu tủa.
- Làm khô AND sau đó thêm 0,05 ml nươc khử ion.


Xin được các cao thủ chỉ điêmr cho vài chiêu!