Tuấn Anh: Cần phương pháp phân lập Actinomycess và Paenibaciluss

[Lê Tuấn Anh]

Chào các Bác:
Các Bác có phương pháp phân lập và định lượng Actinomycess và Paenibaciluss thì share cho em với nhé, hiện nay đang cần gấp, mà seach thấy nhiều quá, lọc không nổi....
Cám ơn các Bác nhiều ...

 

[Duyên Anh]

Bạn muốn phân lập Actinomyces từ đâu?, đất hay bùn? trước đây mình có phân lập loại này, laọi này có khả năng sinh kháng sinh. Thường mình hay lấy mẫu đất vùng có trồng cây có tinh dầu. Mình không biết ý đồ của bạn.
-Trước hết bạn lấy mẫu đất: có thể phân lập ngay, nếu chưa thì bảo quản trong tủ lạnh ở 2-4oC
- Môi trường phân lập là ISP4 có thành phần như sau:
tinh bột tan: 10g
K2HPO4: 1g
MgSO4.7H2O:1g
NaCl: 1g
(NH4)2SO4: 2g
CaCO3: 2g
Thạch: 20g
Vi lượng (dung dịch pha trước *): 1ml
Bổ sung nước cất lên 1ml
điều chỉnh pH từ 7-7,2

* Trong đó vi lượng do cận một lượng rất ít, do đó pha sẵn trong dung dịch mẹ: 100ml dd vi lượng gồm: MnCl2.4H2O: 0,1
FeSO4.7H2O: 0,1
ZnSO4.7 H2O: 0,1

- cân 10 g mẫu đất hay bùn hoà với 90ml dung dịch K2Cr2O7 0,4%, trộn đều, tiếp tực pha loãng thành các nồng độ 1/10- 1/100-....1/1000000
Dịch pha loãng được phân phối trên đĩa petri làm sãn môi trường thạch ISP4, đặt úp đĩa trong tủ ấm ổn nhiệt từ 28-30oC khoảng 7-14 ngày.
Môi trường nầy nghèo dinh dưỡng nên tụi actinomices khó bị nhiễm lắm, actinomyces có thể mọc trên môi trường ngèo dinh dưỡng, tụi vi khuẩn khac chưa kịp mọc. Sau 7-14 ngày bạn sẽ thấy các khuẩn lạc tách rời, (các khuẩn lạc tụi này sần sùi đặc trưng lắm, và bám rất sâu và chắc trong môi trường, còn có nhiều màu nữa. mình ssẽ tìm ảnh gửi cho bạn sau), bạn tách khuẩn lạc (nhớ là khuẩn lạc hoàn toàn rời nhau) đó ra và cấy sang môi trường thạch nghiêng khoảng vài lần để thuần khiết giống.
Giíong được bảo quản trong môi trường ISP4, nuôi ccấy trong tủ ấm từ 7-14 ngày đến khi bào tử chín. Bảo quản tủ lạnh. Khi sử dụng nghiêng cứu cần phải cấy chuyền lại. cứ sau 1 tháng lại cấy chuyền 1 lần.
Chăvs là bạn đã từng thao tác trong phòng thí nghiệm vi sinh rồi đúng không?

 

[Duyên Anh]

Hoặc bạn có thể dùng môi trường Gauze:

tinh bột tan: 10g
K2HPO4: 0,5g
NaCl: 0,5g
MgSO4:0,5g
FeSO4: 0,01 (nên pha 100ml dung dịch mẹ trước, lấy 1ml cho vao môi trường)
KNO3: 1g
Thạch: 20g
Bổ sung nước cất lên 1ml
điều chỉnh pH từ 7,2-7,4

 

[Lê Tuấn Anh]

Cám ơn chị Duyên Anh nhiều; Trước đây em dùng môi trường SCA nhưng bị nhiễm nhiều quá; mục đích đầu tiên là xác định mật độ của chúng thôi, sau đó mới xác định từng loại.
Còn loại Paenibacillus thì chị có thông tin gì không ạ ...
Mail của em: tuananhhoasinh@yahoo.com
Messenger: tuananhhoasinh