Lê Đoàn Thanh Lâm
Senior Member
Cho hỏi bác nào đã làm việc với chủng Bifidobacterium, em co chút vấn đề muốn trao đổi?
Bifidobacterium
- Thread starter Lê Đoàn Thanh Lâm
- Start date
Bùi Hồng Quân
Junior Member
Anh Lâm nêu vấn đề đi
Lê Đoàn Thanh Lâm
Senior Member
Quân cũng làm việc trên bọn này à?
Mình đang làm với B. bifidum, đang có vấn đề với môi trường selective của chủng này, muốn hỏi xem mọi người dùng các loại antibiotics nào cùng với môi trường MRS chung của các chùng vi khuẩn lactic.
Bùi Hồng Quân
Junior Member
Chào Lâm,
Bọn mình cũng làm cách đây 4 năm rồi.
Xin lỗi vì dạo này không ghé vì bận quá.
Trước đây mình dùng môi trường RCA (theo BBL mannual) với điều kiện hiếu khí gần như tuyệt đối (thực ra cái này dùng cho clostridia nhưng cũng không nhớ hồi đó tại sao lại dùng nó - hình như là đọc trong BBL manual nó nói thế). Ngoài ra có một số các tiểu sảo khác như: phải chọn đúng nguồn để phân lập (mà chắc chắn trong đó có) - nói thì hơi thô một chút - nhưng hồi đó bọn mình đã dùng phân của đứa trẻ mới để đang bú sữa mẹ.
Quan trọng là nó mọc, sau đó chọn khuẩn lạc nhuộm gram tìm loại khuẩn lạc mà nhuộm gram có hình chữ Y,V. Tiếp tục cấy thuần và đưa đi định danh. tất nhiên phần định danh mơi là quan trọng.
Xin xem thêm trong file word đính kèm nhé. Hồi đó mấy bạn sinh viên chụp hình trên hiển vi hơi mờ chút.
Vậy nhé.
Good luck
Hq.
Bọn mình cũng làm cách đây 4 năm rồi.
Xin lỗi vì dạo này không ghé vì bận quá.
Trước đây mình dùng môi trường RCA (theo BBL mannual) với điều kiện hiếu khí gần như tuyệt đối (thực ra cái này dùng cho clostridia nhưng cũng không nhớ hồi đó tại sao lại dùng nó - hình như là đọc trong BBL manual nó nói thế). Ngoài ra có một số các tiểu sảo khác như: phải chọn đúng nguồn để phân lập (mà chắc chắn trong đó có) - nói thì hơi thô một chút - nhưng hồi đó bọn mình đã dùng phân của đứa trẻ mới để đang bú sữa mẹ.
Quan trọng là nó mọc, sau đó chọn khuẩn lạc nhuộm gram tìm loại khuẩn lạc mà nhuộm gram có hình chữ Y,V. Tiếp tục cấy thuần và đưa đi định danh. tất nhiên phần định danh mơi là quan trọng.
Xin xem thêm trong file word đính kèm nhé. Hồi đó mấy bạn sinh viên chụp hình trên hiển vi hơi mờ chút.
Vậy nhé.
Good luck
Hq.
Bùi Hồng Quân
Junior Member
Gửi mãi mới được. Còn cái hình nặng quá đành phải xoá gừi cho Lâm mấy môi trường thôi
Lê Đoàn Thanh Lâm
Senior Member
Cảm ơn Quân đã gửi tài liệu .
<?xml:namespace prefix = o ns = "urn:schemas-microsoft-com
fficeffice" /><o> </o>
Vấn đề của mình là môi trường chọn lọc, chứ không phải là bước phân lập. Vì mình có chủng trong tay rồi, nhưng khi mình sản xuất các sản phẩm thực phẩm có chứa bifidobacterium thì khó khăn để có thể định lượng được số tế bào bifidobacterium trong một môi trường có chứa các chủng vi khuẩn lactic khác nữa như lactobacillus, lactoacidophilus... Cần một môi trường chọn lọc đặc hiệu với chủng của mình, chỉ cho phép chủng của mình phát triển trong khi tiêu diệt sự phát triển của các chúng vi khuẩn lactic khác. Môi trường mà Quân đề cập là môi trường chung thôi, không áp dụng trong trường hợp này được. Cái mình muốn tham khảo là môi trường chọn lọc đối với chủng bifidobacteria của nơi khác, để từ đó có thể tìm ra môi trường riêng của mình.
Vì Quân đã nhuộm Gram rồi nên mình muốn hỏi, kích thước tế bào chủng bifido của Quân như thế nào, hình thái tế bào là chữ Y và V như có xâu chuỗi vào nhau không ?
Thanks.
<?xml:namespace prefix = o ns = "urn:schemas-microsoft-com
fficeffice" /><o> </o>Vấn đề của mình là môi trường chọn lọc, chứ không phải là bước phân lập. Vì mình có chủng trong tay rồi, nhưng khi mình sản xuất các sản phẩm thực phẩm có chứa bifidobacterium thì khó khăn để có thể định lượng được số tế bào bifidobacterium trong một môi trường có chứa các chủng vi khuẩn lactic khác nữa như lactobacillus, lactoacidophilus... Cần một môi trường chọn lọc đặc hiệu với chủng của mình, chỉ cho phép chủng của mình phát triển trong khi tiêu diệt sự phát triển của các chúng vi khuẩn lactic khác. Môi trường mà Quân đề cập là môi trường chung thôi, không áp dụng trong trường hợp này được. Cái mình muốn tham khảo là môi trường chọn lọc đối với chủng bifidobacteria của nơi khác, để từ đó có thể tìm ra môi trường riêng của mình.
Vì Quân đã nhuộm Gram rồi nên mình muốn hỏi, kích thước tế bào chủng bifido của Quân như thế nào, hình thái tế bào là chữ Y và V như có xâu chuỗi vào nhau không ?
Thanks.
Hoabongbut
Junior Member
Hồi mình làm đồ án tốt nghiệp cũng làm với Bifidobifidum, nhưng chả có con nào hình chữ Y hay V cả, vẫn toàn là hình que thôi. Nhưng mập và ngắn hơn Lactobacillus. Hình nó hơi ú ú ý. Khuẩn lạc của nó thì lên khoẻ lắm.
Lê Đoàn Thanh Lâm
Senior Member
Khuẩn lạc của bạn mọc khỏe lắm nhưng ở môi trường nào vậy ? Điều kiện nuôi cấy là yếm khí hay hiếu khí, nhiệt độ bao nhiêu vậy ?
Bùi Hồng Quân
Junior Member
À giờ mới hiểu ý của Lâm.
Lâm thử cách này xem: Hiện Lâm có các chủng thuần đúng không.
Lâm lấy từng chủng riêng lẻ, thử đề kháng kháng sinh trên một số kháng sinh khác nhau (kháng sinh dùng cho vi khuẩn gram dương và thậm chí dùng cho vi khuẩn gram âm hoặc phổ rộng cũng được). Dùng mấy loại mới ấy (làm trên môi trường MRS). pp khuếch tán đĩa giấy.
Chịu khó chút. Thử khoảng chục loại kháng sinh. xem các con nào chỉ đề kháng với kháng sinh đó và tiêu diệt những con khác thì dùng (những con khác nhạy cảm). Công việc này cũng không mất nhiều thời gian lắm đâu (nhờ phòng vi sinh của bệnh viện họ làm nhanh lắm - tất nhiên là có tay trong).
Sau khi xác định được đề kháng bằng đĩa giấy thì xác định theo phương pháp MIC đễ biết nồng độ kháng sinh đề kháng. (Công việc này mất khoảng 1 tuần)
Ngoài ra, cách xác định dựa vào hình thái khuẩn lạc cũng cho mình một con số tương đối để dự đoán, ước lượng (tất nhiên là không chính xác nhưng trong trường hợp có hai con cùng đề kháng với một loại kháng sinh mà mình bắt buốc phải làm như thế).
Ngoài ra Lâm cũng có thể thử các hóa chất khác.
Hình vi thể của bifi hơi mờ. Hồi đó mấy em sinh viên chụp nên giờ không có file hình, phải chép từ word ra. Nhưng chắc chắn có phân nhánh thành hình chữ Y. Tế bào lớn hơn so với lactobacillus (tất nhiên chỉ tương đối thôi và không thể so sánh vì mọc trên hai môi trường khác nhau).
Q có vài suy nghĩ thế. Cũng có thể chưa đúng lắm.
Có gì trao đổi thêm nhé.
Lâm thử cách này xem: Hiện Lâm có các chủng thuần đúng không.
Lâm lấy từng chủng riêng lẻ, thử đề kháng kháng sinh trên một số kháng sinh khác nhau (kháng sinh dùng cho vi khuẩn gram dương và thậm chí dùng cho vi khuẩn gram âm hoặc phổ rộng cũng được). Dùng mấy loại mới ấy (làm trên môi trường MRS). pp khuếch tán đĩa giấy.
Chịu khó chút. Thử khoảng chục loại kháng sinh. xem các con nào chỉ đề kháng với kháng sinh đó và tiêu diệt những con khác thì dùng (những con khác nhạy cảm). Công việc này cũng không mất nhiều thời gian lắm đâu (nhờ phòng vi sinh của bệnh viện họ làm nhanh lắm - tất nhiên là có tay trong).
Sau khi xác định được đề kháng bằng đĩa giấy thì xác định theo phương pháp MIC đễ biết nồng độ kháng sinh đề kháng. (Công việc này mất khoảng 1 tuần)
Ngoài ra, cách xác định dựa vào hình thái khuẩn lạc cũng cho mình một con số tương đối để dự đoán, ước lượng (tất nhiên là không chính xác nhưng trong trường hợp có hai con cùng đề kháng với một loại kháng sinh mà mình bắt buốc phải làm như thế).
Ngoài ra Lâm cũng có thể thử các hóa chất khác.
Hình vi thể của bifi hơi mờ. Hồi đó mấy em sinh viên chụp nên giờ không có file hình, phải chép từ word ra. Nhưng chắc chắn có phân nhánh thành hình chữ Y. Tế bào lớn hơn so với lactobacillus (tất nhiên chỉ tương đối thôi và không thể so sánh vì mọc trên hai môi trường khác nhau).
Q có vài suy nghĩ thế. Cũng có thể chưa đúng lắm.
Có gì trao đổi thêm nhé.
Attachments
Lê Đoàn Thanh Lâm
Senior Member
Mình cũng đã làm theo phương phaps MIC sau khi chọn ra 4 loại kháng sinh Paronomycin&Neomycin sulfate, Lithium chloride, Nalidixic acid. Đã ra được môi trường chọn lọc cho con Bifido của mình. Nhưng thỉnh thoảng vẫn bị mấy con lactobacillus, streptococcus mọc trên môi trường của mình, mà khi làm từng chủng riêng trên môi trường đó thì rõ ràng là ức chế mấy con này phát triển. Chắc tại các nồng đô kháng sinh sử dụng trong môi trường rất nhỏ, lúc cân định lượng cho vao môi trường có sai sot giữa các lần với nhau.
Bùi Hồng Quân
Junior Member
Cũng có thể do pH khác nhau không. Khi kiểm tra bằng MIC Lâm có kiểm chú ý đến pH không nhỉ?
Theo kinh nghiệm thì cách tốt nhất khi làm MIC là dùng môi trường giống như môi trường sẽ bổ sung kháng sinh (kể cả pH và các chất trong môi trường).
Lâm cũng bên chú ý khi sử dụng kháng sinh, nó rất dễ bị phân hủy bời ánh sáng, thay đổi pH và đôi khi một số chất tác động.
Ngoài ra nếu vẫn cứ lẫn lacto thì có thể do lacto đó kháng nhẹ với kháng sinh.
Theo kinh nghiệm thì cách tốt nhất khi làm MIC là dùng môi trường giống như môi trường sẽ bổ sung kháng sinh (kể cả pH và các chất trong môi trường).
Lâm cũng bên chú ý khi sử dụng kháng sinh, nó rất dễ bị phân hủy bời ánh sáng, thay đổi pH và đôi khi một số chất tác động.
Ngoài ra nếu vẫn cứ lẫn lacto thì có thể do lacto đó kháng nhẹ với kháng sinh.
Em đang làm về bifidobacterium đây ạ. Nhưng trong môi trường bình thường chưa có kháng sinh thì nó mọc tốt lắm có cả lactobacillus , mà có kháng sinh rồi thì ko mọc con nào. Em cũng muốn phân lập chỉ riêng con Bifido thôi mà sao khó quá, ai có kinh nghiệm hay protocol chuẩn share em với
Con này nó kị khí, nếu bạn không có tủ nuôi có thể nuôi trong bể ổn nhiệt, nhiệt độ dao động từ 37-40 độ C mà nhớ bọc giấy báo vào. Mình cũng đang làm về con này, nhưng đang thử kháng sinh các thể loại để làm sao tách được riêng nó ra
