Tách chiết Protein tinh khiết từ lòng đỏ trứng gà

[Nguyễn Thanh Hiên]

Mục đích: Thu được hàm lượng IgY cao nhất
Vật liệu và phương pháp<o>></o>>
- Trứng gà
- Dung dich TBS: chứa 0,1% Sodium axit
- Dung dịch Sunphat Dextran 10% pha trong TBS
- CaCl₂1M pha trong TBS
- Sodium Sunphat
- Sodium Sunphat 36% (dung dich quá bão hoà: cho muối đến khi không tan được nữa thì hút phần trên)
Phương pháp<o>></o>>
- B1: Đập trứng, tách long đỏ và lòng trắng, dung kẹp vô trùng cắt màng của long đỏ, cho long đỏ vào bình đựng, thường thì thể tích long đỏ thu được là 10ml.
Thêm TBS vào bình đựng long đỏ để thể tích đạt 50ml, sau đó ly tâm dung dịch 2000G/50’ ở 20^oC
- B2: Bỏ cặn của dung dịch thu được sau ly tâm, thêm vào 3ml Sunphat Dextran và 7,5ml CaCl₂ vào dịch nổi. Trộn đều hỗn hợp thu được và ủ ở 30^oC ở nhiệt độ phòng (22-25^oC).
- B3: Ly tâm ở 2000G/20 phút ở 20^oC. Giữ lại toàn dung dịch (cả phần nổi và phần cặn). Tiến hành làm bước tiếp theo hoặc bảo quản ở nhiệt độ mát.
- B4: Hoà tàn phần kết tủa vào 50ml TBS, tiến hành ly tâm trở lại sau đó trộn vào phần nước nổi.
Cho thêm dung dịch Sunphat dextran vào nếu thấy sau ly tâm vẫn có cặn. Khuấy đều ủ trong 30 phút rồi ly tâm và để lắng.
- B5: Thêm TBS vào phần cặn, đến khi đạt thể tích là 100ml thì them 20g Na₂SO₄ vào, khuấy cho tan và ủ ở nhiệt độ phòng trong 1h.
- B6: Đem ly tâm 2000G/ 20 phút ở 25^oC sau đó loại bỏ phần nước nổi và xác định thể tích của cặn.
- B7: Hoà kết tủa (lúc này là Protein) trong TBS để thể tích dung dịch là 10ml.
- B8: Thêm Na₂SO₄ để đạt 9% rồi cho kết tủa lại. Trộn và ủ trong 1h ở 22 ^oC. Ly tâm 2000G/20 phút ở 25^oC. Ghi lại thể tích dung dịch nổi.
- B9: Thêm dung dịch Na₂SO₄ để tạo ra nồng độ cuối cùng là 14%. Sau đó trộn và ủ ở nhiệt độ phòng.
- B10: Nhắc lại bước số 6. Hoà tan cặn kết tủa trong 5-10 ml TBS. Thẩm tích với TBS.
Sản lượng Pr thu được phải đạt từ 10-15mg/1ml lòng đỏ.
<o>> </o>>
Note:<o>></o>>
- Na₂SO₄ gần bão hoà bảo quản ở 25-30^oC
- IgY tinh khiết 95-97%.
- IgY không được bảo quản ở điều kiện đông lạnh mà chỉ cần bảo quản trong dung dịch - - TBS ở 4^oC có chất bảo quản phù hợp trong nhiều tháng.
--------------------------------------------
Mình chỉ biết được tới đó thôi, bạn nào biết cách gì mới thì chỉ cho mình với nha vì cái dd TBS đó đắt quá pà con ah
---------------------------------------------
Ếch !

 

[thapbeo]

tại sao lại tách từ lòng đỏ trứng gà nhỉ? mình đang làm 1 đề tài tương tự nhưng lại tách Lysozyme từ lòng trắng trứng gà. mong bà con cho biết ý kiến và phương pháp với.