Xgal

[Trần Diệu Linh]

Em có 1 câu hỏi nữa:

Khi tiến hành cloning một đoạn DNA vào vectơ biểu hiện:
Trên vectơ này có Ampiciline resistance và lacZ để screening.
Tất cả các công đoạn trước khi transformation vào tế bào Ecoli TopF đều được kiểm tra và cho kết quả tốt.
Sau khi transform cùng Xgal và IPTG trên đĩa thạch chứa ampiciline, e thu được một số khuẩn lạc xanh và trắng. Theo lý thuyết, khuẩn lạc trắng phải chứa đoạn DNA insert. Nhưng khi tách chiết DNA plasmid từ các khuẩn lạc trắng thì em ko tìm thấy một đoạn insert nào.
Em cũng đã search trên mạng để tìm lý do nhưng chưa cảm thấy thỏa đáng. Có anh chị nào giải thích hộ em tại sao ko có đoạn insert chèn vào vị trí của lacZ mà khuẩn lạc vẫn màu trắng ko ạ? :?

 

[Nguyễn Xuân Hưng]

Có một số nguyên nhân, chị nên nêu thêm chi tiết về bước làm như DNA dùng cho ligate được xử lý thế nào, kiểm tra plasmid có insert hay không bằng cách nào....

Có thể:

- Có insert nhưng bị đột biến mất vị trí nhận biết của RE
- Chị dùng RE để cut plasmid tách ra nhưng RE có vấn đề
- Bị nhiễm DNA ngoại lai nên không cut được hoặc cut ra sản phẩm có kích thước không đúng
- ...........

 

[Vũ Hải Chi]

...ko có đoạn insert chèn vào vị trí của lacZ... ?

Theo tôi, bác thử sequencing, biết đâu có gì chèn vào trong đó thì sao.

 

[Nguyễn Viết Dũng]

Em có 1 câu hỏi nữa:

Khi tiến hành cloning một đoạn DNA vào vectơ biểu hiện:
Trên vectơ này có Ampiciline resistance và lacZ để screening.
Tất cả các công đoạn trước khi transformation vào tế bào Ecoli TopF đều được kiểm tra và cho kết quả tốt.
Sau khi transform cùng Xgal và IPTG trên đĩa thạch chứa ampiciline, e thu được một số khuẩn lạc xanh và trắng. Theo lý thuyết, khuẩn lạc trắng phải chứa đoạn DNA insert. Nhưng khi tách chiết DNA plasmid từ các khuẩn lạc trắng thì em ko tìm thấy một đoạn insert nào.
Em cũng đã search trên mạng để tìm lý do nhưng chưa cảm thấy thỏa đáng. Có anh chị nào giải thích hộ em tại sao ko có đoạn insert chèn vào vị trí của lacZ mà khuẩn lạc vẫn màu trắng ko ạ? :?

Vấn đề bạn nêu trên là một hiện tương có thể xảy ra trong thực nghiệm và thường xảy ra nếu đoạn insert của bạn có kích thước lớn >900bp. Trong trường hợp này bạn hãy mạnh dạn kiểm tra luôn các khuẩn lạc màu xanh xem nó có mang đoạn insert của bạn hay không, bạn vẫn còn một chút hy vọng.

Chúc may mắn

 

[Trần Diệu Linh]

Cảm ơn ý kiến của mọi người. Đúng là đoạn insert e chèn vào là 1,6kb. E đã thử vận may với khuẩn lạc màu xanh nhưng cũng ko được. Sau khi lặp lại thí nghiệm 1 lần nữa, kết quả ko có gì thay đổi: vẫn là khuẩn lạc trắng và ko có insert. Nên e đang thử kiểm tra lại cái vector dùng để ligate xem sao.
Vì thực ra nếu ko có insert chèn vào thì theo lý thuyết ko có lý do gì mà lại xuất hiện những khuẩn lạc màu trắng cả.